色谱法基础 An introduction to chromatography.ppt

第7章 色谱分析法概论 7.1 概述 7.2 色谱过程与术语 7.3 色谱分离的基本理论 7.4 基本类型色谱法的分离机制 7.5 色谱法的发展趋势 7.1概述7.1.1色谱法的起源和发展 1906年，俄国植物学家 M.Tswett 发表了他的实验结果：为了分离植物色素，他将含有植物色素的石油醚提取液倒入装有碳酸钙粉末的玻璃管中，并用石油醚自上而下淋洗，由于不同的色素在碳酸钙颗粒表面的吸附力不同，随着淋洗的进行，不同色素向下移动的速度不同，从而形成一圈圈不同颜色的色带，使各色素成分得到了分离。他将这种分离方法命名为色谱法(chromatography)。在此后的20多年里，几乎无人问津这一技术。到了1931年，Kuhn 等用同样的方法成功地分离了胡萝卜素和叶黄素，从此色谱法开始为人们所重视，相继出现了各种色谱方法。 7.1概述7.1.1色谱法的起源和发展 1906，俄国植物学家 M.Tswett 发明色谱法，色谱之父 1931，对液固吸附色谱的杰出贡献者库恩，分离出60多种胡萝卜素，核黄素、维生素，获1938年诺贝尔化学奖 蒂塞利乌斯(Tiselius)因电泳分析和分析方法的研究，发现血清蛋白组分，获1948年诺贝尔化学奖 1941，马丁(Martin)和辛格(Synge)创始分配色谱特别是纸色谱而共获1952年诺贝尔化学奖 氨基酸自动分析仪发明人S.穆尔(Stanford Moore)和W.H.斯坦(William Howard Stein),定量分析方法解决了有关氨基酸、多肽、蛋白质等复杂的生物化学问题，获1972年诺贝尔化学奖 7.1概述 7.1.2色谱法的定义与分类 7.1概述 7.1.2色谱法的定义与分类 1.按两相分子的聚集状态分类 2. 按固定相的固定方式分类 7.2色谱过程与术语 7.2.1色谱过程 7.2.2基本术语 7.2色谱过程与术语7.2.1色谱过程 色谱过程是物质分子在相对运动的两相间分配平衡的过程。在混合物中，若两个组分的分配系数不等，则被流动相携带移动的速率不等，即形成差速迁移而被分离。如图所示。 7.2色谱过程与术语7.2.1色谱过程 色谱过程的实质 (1)色谱过程是吸附与解析的过程； (2)不同组分极性的差异导致吸附与解析的差异； (3)不同组分向前移动的过程是差异不断累积过程，是在动态中由量变到质变的过程。 7.2色谱过程与术语7.2.2基本术语 1.色谱 2.保留值 3.分配系数(K)和容量因子(k) 4.分离参数 7.2色谱过程与术语7.2.2基本术语1.色谱 7.2色谱过程与术语7.2.2基本术语1.色谱 7.2色谱过程与术语7.2.2基本术语2.保留值 7.2色谱过程与术语7.2.2基本术语2.保留值 7.2色谱过程与术语7.2.2基本术语3.分配系数(K)和容量因子(k) 7.2色谱过程与术语7.2.2基本术语3.分配系数(K)和容量因子(k) 7.2色谱过程与术语7.2.2基本术语4.分离参数 7.2色谱过程与术语7.2.2基本术语4.分离参数 色谱分析的目的就是要将混合物中的各组分分离，为了获得较好的准确度，一般规定两相邻峰的分离度 Rs≥1.5时，可认为两组分完全分离。 7.2色谱过程与术语7.2.2基本术语例题17-1 一个气相色谱柱，由固定液的涂量及固定液在柱温下的密度计算得Vs＝14.1mL，载气流速为43.75mL/min。分离一个含A、B、C三组分的样品，测得组分保留时间分别为1.41min、2.67min、4.18min、空气为0.24min。试计算：⑴死体积；⑵各组分的调整保留时间；⑶相邻两组分的分离因子。 解：已知Fc＝ 43.75mL/min，死时间t0＝0.24min。 7.3色谱分离的基本理论 7.3.1 分配系数与保留行为的关系 7.3.2 等温线 7.3.3 塔板理论 7.3.4 速率理论 7.3.5 影响分离度的因素 7.3色谱分离的基本理论7.3.1分配系数与保留行为的关系 7.3色谱分离的基本理论7.3.2等温线 7.3色谱分离的基本理论7.3.2等温线 对称因子： 完全对称：fs=1.00 对称峰：fs=0.95~1.05 前沿峰：fs＜0.95 拖尾峰：fs＞1.05 7.3色谱分离的基本理论7.3.3塔板理论 7.3色谱分离的基本理论7.3.3塔板理论1.塔板理论的基本假设 色谱柱是由一系列连续、等距的水平塔组成，在柱内每层塔板内部，组分能够在流动相和固定相两相中达到平衡。 流动相通过色谱柱呈间歇式前进运动，每次前进为一个塔板体积。 样品和流动相同时加在第一个塔板上，且样品垂直于前进方向的扩散(即纵向扩散)可以忽略。 分配系数在各塔板上是常数。 7.3色谱分离的基本