基因工程课件第一章基本技术1.ppt

五、基因的化学合成 基因就其本质来说，是一段具有特定生物学功能的核苷酸序列，据此，只要掌握了基因的分子结构，便有可能在实验室用化学的方法体外进行人工合成。 早在1967年，Khorana 即提出了化学合成基因的设想，并进行了实践。70年代后，由于DNA序列测定技术的进步，许多基因序列被测定，与此同时，重组DNA技术也取得令人振奋的成绩。 1979年, Khorana首次在《Science》上发表了“一个基因合成”的学术论文。 标志着人工化学合成基因取得了成功。此后至今天，许多的基因被化学合成。 值得提及的是我国科学家于1981年完成了酵母丙氨酸 tRNA的全合成。 2、化学人工合成基因的方法 就程序而言，首先合成有一定长度、具有特定序列结构的寡核苷酸片段，然后用DNA连接酶按一定的顺序共价地将这些寡聚核苷酸片段连接起来，行成了具有生物功能的基因。 （1）磷酸二脂法合成寡聚核苷酸： 将两个在5′-或3′-末端各带有适当保护基的脱氧单核苷酸连接起来，形成一个带有磷酸二酯键的脱氧二核苷酸分子。 Khorana等人1979年首创。成功的合成了具有生物活性的大肠杆菌酪氨酸转移核糖核酸gene 为了确保磷酸二酯键生成在需要的脱氧单核苷酸之间，必须用适当的方