细胞遗传学实验一X染色体观察教案.pdfVIP

实验一 人体Barr 小体观察 授课教师 邢沈阳 一、实验目的与要求 1、学习人类X染色体的检测方法。 2、认识雌性哺乳动物X染色体失活 假说和剂量补偿效应的机制 二、实验原理 在XY型性别决定的生物个体中，雌 性个体的细胞中有两条X染色体，而雌 性个体的细胞中仅有一条X染色体。由 于在两性个体中X染色体的数量是不相 等的，因而雌雄个体X染色体上的基因 产物也可能是不相等的。 针对这一现象Muller于1932年提出 剂量补偿效应，说明可以使具有两份基 因的个体和具有一份基因的个体表现出 二、实验原理 相同表型的一种遗传机制的观点。 1949年Barr等人发现在猫的雌性个体 内，神经细胞核膜内缘有一染色很深 的小体，而雄性个体细胞中则没有。 后发现在哺乳动物雌性间期细胞核内 均有这一小体而雄性则没有，而称为 X染色质(或Barr小体) 。 X染色质(X-chromatin) Barr小体，在雌性哺乳类间期细胞中 都有这种特征性小体； 在人类女性口腔上皮细胞中X小体一 般为1~1.5 μm，呈三角形或椭圆形； X染色质数=X染色体数-1 性染色质(sex chromatin) Lyon假说(Lyon hypothesis) 1961年Lyon提出： 1、雌性哺乳动物体细胞内的两条X 染色体，仅有一条有活性，另一条无 转录活性，在间期异固缩成为X染色 质； 2、失活发生于胚胎早期(人胚第16 天) ； Lyon假说(Lyon hypothesis) 3 、X染色体的失活是随机性的： 父源的和母源X染色体失活的机会各 占1/2，一旦某一特定细胞内失活的X 染色体是父源的，那么，由这个细胞 所克隆的细胞群内，每一个细胞的X 染色质都是父源的，反之都是母源 的； Lyon假说(Lyon hypothesis) 4、杂合体雌性在伴性基因的作用上是 嵌合体(mosaic)：某些细胞中来自父方 的伴性基因表达，有些细胞中来自母 方的伴性基因表达，这两类细胞随机 地镶嵌存在； 5、在形成生殖细胞时，失活的X染色 体重新激活。 三、试验材料 人体口腔上皮细胞 人体毛囊细胞 四、试剂与器材 1、试剂 0.85%生理盐水；1mol/L或 5mol/L盐酸或浓盐酸和95% 乙醇1:1的 混合液；品红染液。 2、器材 显微镜；载玻片；盖玻片； 吸水纸；无菌牙签；计数器等。 五、试验过程 1、口腔粘膜细胞Barr小体显示法 取材前食用水漱口→以无菌牙签刮取口 腔颊部黏膜(第一次的刮取物弃去) →将 刮取物均匀涂在载玻片上，空气干燥→ 品红染色10~15分钟→倾斜玻片倒掉染液 →吸水纸拭干多余染液→显微镜下观察。 五、试验过程 2、发根毛囊细胞Barr小体显示法 1)取带有发根的头发，2~3cm，围绕发 根部的1圈长2~3cm的白色物体即是毛 囊团，将其放置于载玻片上； 2)在毛囊细胞处滴加一滴浓盐酸和95% 乙醇1:1的混合液，约10分钟后可使毛 囊细胞得到充分软化； 五、试验过程 2、发根毛囊细胞Barr小体显示法 3) 以清水冲洗2~3次，将酸解液冲洗干 净； 4)拿起发根得到梢部，将其上毛囊细胞 轻轻蹭于另一干净载玻片上(一根发根 的毛囊细胞可以转移到3~4张载玻片 上) ； 5)滴加1滴染液染色10分钟后镜检。 六、试验结果 观察100个细胞，统计X小体的出镜率 七、注意事项 1、取材不要来回刮，要向着一个方向 刮一次； 2、涂片不要太厚； 3 、不要让毛囊细胞堆积，要充分转移 毛囊细胞； 4、染色液不要滴多，以免细胞丢失。 七、试验报告 1、你统计的X小体的频率如何？解释 为什么不