麦芽根中5′-磷酸二酯酶的分离提纯与其固定化.pdfVIP

第 26卷 第 4期 湖南理工学院学报(自然科学版) V 1．26NO．4 2013年 l2月 JournalofHunanInstituteofScienceandTechnologyfNatllra1Sciences1 Dec．2013 麦芽根中5一磷酸二酯酶的分离提纯及其固定化 朱政斌，华 杰，许怡学，任 劭，朱 群 (湖南理工学院 化学化工学院，湖南 岳阳 414006) 摘 要：从麦芽根中分离得到了5一磷酸二酯酶，采用戊二醛为交联剂，将该酶 固定到壳聚糖上，用于酵母RNA的催化 水解，以制备5一核苷酸．研究了酶固定化反应的影响因素，在最适务件下，酶活回收率可达53．6％．进一步研究了固定化5一 磷酸二酯酶的酶学性质，测得 固定化酶的米氏常数 为15．38mg／mL(~XRNA为底物)，固定化酶催化水解RNA的最适温度 为75℃，最适pH值为5．5，实验发现固定化5．磷酸二酯酶具有更好的耐热性和更高的纯度． 关键词：麦芽根；5-磷酸二酯酶；酶固定化；5-核苷酸：壳聚糖 中图分类号：Q814．2 文献标识码：A 文章编号：1672．5298(2013)04．0061．05 ~一eoarati·0on ann1—1m m oD1i…liZat·i0‘n0I|．一●一Dn0SDn10n1l●eStJeraSe From BarleyRoots ZHUZheng．bin，HUAJie，XUYi。xue，RENShao，ZHUQun (CollegeofChemistryandChemicalEngineering，HunanInstituteofScienceandTechnology，Yueyang414006，China) Abstract：5-phosphodiesterase(5-PDE)wasseparatedfrombarleyrootsandtheimmobilizationofthisenzymeonchitosan wassutdiedusingglutaricdialdehydeasacross—linkingagent．Theimmobilizedenzymecanbeappliedtothehydrolysisofyeast RNAtoyield5-nucleotides．Theresultsshowedthatanenzymerecoveryof53．6％ wasachievedwhenhtereactiontookplaceat theoptimum condition．FurthersutdiesindicatedthatMichaelisconstantfKm)fortheimmobilized5-PDEwas15．38mg／mLwiht yeastRNA asthesubstrate．andtheimmobilizedenzymehadanoptimum pH 5．5．andoptimum temperature75℃ forthehydrolysis ofRNA．Theresultsalsoshowedthathteimmobilizedenzymewaspurer,andhadabetterthermostabilitythanthefree5-PDE． Keywords：barleyroots；5-phosphodiesterase；immobilization；5-nucleotides；chitosan 5一核苷酸在医药、食品及饲料等行业有着广泛的应用，目前工业上常采用酶法水解酵母RNA的工艺 来生产 5一核苷酸，因此研究 5一磷酸二酯酶(Exonuclease)的分离提纯技术和酶固定化技术，对提高 5核苷 酸的生产技术具有重要的意义．Fujimoto等…研究发现，利用桔青霉发酵可以制得一种可以水解 RNA和 DNA 的核酸酶，水解产物中既含有 5。核苷酸，也含有 3一核苷酸，该酶被称之为核酸酶 Pl(nucleaseP1， EC3．1．30．1)．科学家们发现，麦芽根中含有丰富的磷酸二酯酶，Laufer[2]从麦芽根中提取了一种核酸酶，可 以用于酵母RNA的催化降解，水解产物有5一核苷酸，也含有3．核苷酸．许多事实表明3【，训，麦芽根中含有