植物染色体标本的制备及观察.doc

植物染色体标本的制备和观察 摘要：目的 1、掌握常规压片法制备植物染色体标本的基本原理和方法；2、学会观察和统计植物细胞的染色体数目；3、了解和学习去壁低渗法进行植物染色体制片的基本原理和方法。方法 大蒜的根尖是分裂比较旺盛的，我们可以利用秋水仙素处理根尖使得大蒜根尖的细胞分裂处于分裂中期，然后经固定染色等处理将染色体染色固定，以便观察。结果 大蒜的染色体有16条，都被染色成红色的条状或细丝状物质。结论 大蒜染色体有16条。 关键词：植物染色体；大蒜；秋水仙素 前言 染色体是遗传物质的载体，本实验便是观察染色体的形态和数目。植物染色体标本的制备，常用分生组织，如根尖、茎尖和嫩叶做材料。常规压片法仍是当今观察植物染色体常用的方法。其程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等步骤，即可观察到较多的、处于有丝分裂中期的细胞和染色体。由于现在洋葱发根较难，我们采用的是大蒜根尖进行相关实验。 材料与方法70%酒精；95％乙醇；85％乙醇；蒸馏水 5.实验方法和步骤 5.1 取材 先将大蒜浸泡若干小时，然后转入一个垫有湿润滤纸的培养皿中，置25℃恒温培养箱中萌发，待幼根长至1~2cm时，于上午9~11时剪下根尖。 5.2 预处理 将剪下的根尖放进装有0.02%秋水仙素溶液的烧杯中，浸泡处理3～4小时。 5.3 固定 将经过预处理或没有预处理的材料，放到卡诺氏固定液中固定 （固定液的量约为材料的10倍，要求一个容器中所装的材料不能太多，温度不能太高）。固定2～24h后分别在95％ 和85％乙醇中各30min ，再转入70%酒精中，于4℃冰箱内保存，保存时间最好不超过二个月。 5.4 去壁解离 取固定好的各种植物根尖，倒去固定液，用蒸馏水漂洗2～3次，放入1N HCl溶液中60℃水解8～12min，再用蒸馏水洗净。适度的水解分离使材料呈白色微透明，状似豆腐，以解剖针能轻轻压碎为好。 5.5 后低渗 用吸管小心吸去解离液，用蒸馏水慢慢冲洗3～5次，最后停留在蒸馏水中浸泡20~30min左右。 5.6 染色 将根尖放在载玻片中央，用刀片将根冠和伸长区切除，只留乳白色的分生区，用镊子或解剖针将材料轻轻捣碎。滴上一滴改良苯酚品红染液，染色8～15min后，盖上盖玻片。 5.7 压片 在盖玻片上面铺上吸水纸，固定好盖玻片，用拇指垂直压片，然后用铅笔的橡皮头轻轻均匀地敲打盖片，至肉眼见材料呈雾状即可。敲打时，铅笔应垂直于玻片，勿使盖片移动。先在低倍镜下，后用 ①正常处理 ②不经秋水仙素和不经后低渗处理 ③不经秋水仙素但有后低渗处理 ④经秋水仙素但没有后低渗 大蒜 染色体比较粗大，且染色较深，相对其他处理是比较容易数清楚的，视野里的细胞多处于前期和中期，没有看到处于分裂后期和末期的细胞。（如图1） 染色体比较瘦小，有些染色体粘连在一起，不是很容易数清楚。（如图2） 能数清染色体数目，效果跟正常处理差不多，并且可以看到各个时期的染色体。（如图3） 染色体比较粗大，染色较深，效果跟不经秋水仙素和后低渗处理差不多，并且视野里的大部分细胞都是处于分裂间期和前期，少数为中期，没有看到处于分裂后期和末期的细胞。（如图4） 百合 染色体比较粗大，相对未处理而言，染色体相对于比较容易观察，视野里的细胞多处于前期，没有看到处于分裂后期和末期的细胞。（如图5） — 染色体比较细小，但也可以看清染色体，视野里可以找到各个时期的细胞。（如图6） — 1.分析 因为着丝点在分裂后期会自动分裂，两个染色单体分为两个染色体。纺锤丝的作用是将分裂的染色体拉向细胞两极，然后细胞中间自动形成细胞板，最后变成两个细胞。 使用秋水仙素后，纺锤丝的合成被抑制，在后期染色单体分裂后，没有纺锤丝，不能被拉向细胞两极， 图1 图2 图3 图4 图5 图6