中国大型真菌野外采集与分类研究探析方法简述.docVIP

中国大型真菌野外采集及分类研究分析方法简述 　　摘要：指出了大型真菌是菌物中的一个重要类群，我国相关研究开展较晚，但也已摸索出一套野外采集及分类研究分析的方法。从野外采集工作包括野外采集策略、准备工作、野外工作和实验室工作包括形态观察、显微观察、DNA提取、PCR扩增及分子数据分析等分子生物学研究两大部分对大型真菌的研究方法进行了详细地阐述 关键词：大型真菌；野外采集；显微观察；分子生物学研究 中图分类号：Q34文献标识码：A文章编号2016 1引言 真菌是一个古老的生物类群，4亿多年前泥盆纪时期的化石中就发现有真菌。大型真菌是菌物中的一个重要类群，指菌物中子实体大型的一类真菌，泛指广义上的Mushroom 或Macrofungi，即译为蘑菇或蕈菌，地球上的大型真菌资源非常丰富，很多种类是十分美味的食用菌，具有较高的营养价值和药用价值，是目前菌物中最有开发应用前景的一类，但是也有很多种类具有剧毒，所以受到广泛的关注 自16世纪以来，各国科学家就广泛开展了对大型真菌的研究。1735年，在林奈建立的两界分类系统（动物界和植物界）中，把真菌列入植物界；1860年Hogg和1866年Haeckel在先后建立的三界分类系统（原生生物界、动物界和植物界）中，把真菌列入原生生物界；在Copeland（1938）建立的四界分类系统（菌界、原生生物界、动物界和植物界）中，把真菌列入原生生物界；在1969 在Wittaker建立的五界分类系统（原核生物界、原生生物界、植物界、真菌界和动物界）中，才把真菌单独作为一界处理。1851～1950年间是近代真菌学全面发展的时期，20世纪50年代以来，现代真菌学飞速发展，有关真菌的研究著作层出不穷。据估计，全球共有真菌150万种以上，而目前仅知其中的4.6%，约7万种，其中大型真菌约有 1万种[2～3]。我国相关研究开展较晚，但在广大真菌学者研究的基础上，也已摸索出一套野外采集及分类研究分析的方法。20世纪40年代开始对大型真菌进行研究，已记载了大型真菌1200属、5000多种[4～6]，我国目前已知的各类大型真菌约3万多种，其中食、药用菌近1000种，已经人工栽培的约100余种[7]。随着分子生物学技术的迅猛发展，真菌分类学已经从表型分型进入了基因分型的新时代，为方便广大真菌爱好者及初学者迅速掌握大型真菌野外采集及研究方法，本文将在中国科学院昆明植物研究所期间所学到的研究方法介绍如下 2野外采集 2.1采样策略 大型真菌的分布和它们的生长习性息息相关，例如有些子实体有着朝生暮死的特性，这为研究带来很多不确定性，在一年中的某些时候，采样地点的很多物种并不会结实，因此单次采集所得的结果并不可靠，为了对采样地点的大型真菌生态学特性做出正确的估计，在每年结实期内的多次采集是必不可少的。再例如有些子实体如乳牛肝菌等与针叶树有严格的共生关系，故在采样前可依照中国植物志[8]针叶树的分布进行有针对性的设计路线。中国的大型真菌分布较广，根据南北不同的出菇季节，可每年进行多次出菇采集 2.2大型真菌野外采集的准备 自制子实体干燥烘箱（包括联创牌PCT取暖器、定制铁板防风罩和网眼托盘）、吸水纸、自封袋、硅胶、装有Buffer 的离心管、酒精灯、镊子、小勺、GPS 定位仪、数码相机、脚架、采集刀、记录笔、记录纸、反光板、遮阳伞、采集篮、记录纸 2.3野外工作 在野外采集过程中，为了更准确的反映真菌的生境及子实体的新鲜特征，对子实体进行拍照时建议使用脚架固定数码相机，以保证照片的清晰度，光线不足时使用反光板，光线太明亮时使用遮阳伞，拍照时尽量连同生境一同体现，同时还要用采集刀挖出完整的子实体进行拍照，注意动作要轻，不能把菌根或者假菌根挖断以保证子实体基部及菌根的完整性，以方便对其描述和研究的完整性和准确性。另外，菌盖上的附着物如落叶、小虫等也不要弹掉，可判定是否有毒；菌盖上的鳞片、绒毛等应保持完整，盖缘的菌幕残片也要注意保护，作为鉴定的重要依据；菌柄上的绒毛、鳞片等均要保持其完整；腹菌类基部有菌索深入土中，要注意采取；肉质、胶质和蜡质的菌类，保持各部完整[9]。随后用GPS 定位仪定位海拔并记录，同时记录子实体所处的生态环境，如果是共生型真菌要尽可能详尽地记录共生树种，土壤等条件。因为野外采集时间有限，更详细的记录需要回到营地进行补充，另外，建议两人一组，当发现目标，一人进行拍摄，另一人记录信息，以节省时间和精力。最后，将挖出的完整子实体置于不沾的吸水纸中，轻轻包裹好后编号置于采集篮中带回 当日采集结束后要及时打开吸水纸将菌物取出通风，按照编号在记录纸上对子实体新鲜状态作详细的记录，主要包括：菌盖的形状、大小、颜色，是否粘，有