第七章微生物的生长与调控.pptVIP

第七章 微生物的生长及其控制 当同化作用异化作用，生物出现个体生长，即原生质总量增加。 如果平衡生长，也就是说各种细胞组分按照恰当比例增长时，引起个体数目的增加也就是繁殖。 个体生长→个体繁殖→群体生长 群体生长＝个体生长＋个体繁殖 第一节 测定生长繁殖的方法 一 、测生长量 直接法： 测体积法 称干重法 间接法 比浊法（Turbidity Count）：分光光度法(OD450－OD650nm) 生理指标法 选择与微生物生长平行的生理指标。 测含氮量法以及其他指标。 二 计繁殖数 适合测单细胞微生物 （一）、直接法 血球计数板（Hemocytometer ）计数 利用特殊染色（如荧光染色）可以分别计数出死菌与活菌 （二）、间接法 活菌计数法。 根据活菌在液体培养基中会使其变浊或在固体培养基上（内）形成菌落的原理设计的。 利用在固体培养基上（内）形成菌落的菌落计数法（colony-counting methods） 菌落计数法：平板菌落计数法 平板菌落计数法（Plate Counting method） 概念： 把稀释好的一定量菌样通过浇注或涂布的方法，让微生物单细胞一一分散在琼脂平板上（内），待培养后，每一个活细胞形成一个单菌落，即菌落形成单位（colony forming unit，cfu）。根据每个平板的cfu乘一稀释倍数就是菌样的含菌数。 种类： 浇注平板（pour plate method） 涂布平板（spread plate method ） 使用范围 适合各种好氧或厌氧菌 操作步骤： 第二节 微生物的生长规律 一、微生物的个体生长和同步生长 研究微生物细胞内生物化学和细胞化学的方法 电镜观察 同步培养（synchronous culture） 设法使微生物群体中的所有个体细胞尽可能处于同样的细胞生长和分裂周期，然后分析此群体在个阶段的生物化学特性变化，间接了解单个个体向内的相应变化规律。 同步生长（synchronous growth ） 利用同步培养的手段使细胞群体中个体处于分裂步骤一致的生长状态称为同步生长。 同步生长的方法 环境条件诱导法 机械筛选法 二、单细胞微生物的典型生长曲线 生长曲线（growth curve）： 当把少量纯种单细胞微生物接种到恒容积的液体培养基中后，在适宜的温度、通气等体积下，该群体就会由小到大，发生有规律的增长。如果以细胞数目的对数值作纵坐标，以培养时间作横坐标就可画出一条由延滞期、指数期、稳定期和衰亡期4个阶段组成的曲线。 条件： 封闭系统 单细胞微生物 根据微生物生长速率常数（growth?rate?constant ）即每小时分裂次数（r）不同，将生长曲线分为4个时期：延滞期、指数期、稳定期和衰亡期。 ?⑴?延滞期（lag?phase） 又叫适应期、缓慢期或调整期 指把少量微生物接种到新培养液刚开始的一段时间细胞数目不增加的时期，活细胞数目还可能减少。 延滞期特点： 生长速率常数为零。 细胞形态增大和增长，DNA含量增多，RNA特别是rRNA含量增高，原生质呈嗜碱性。 合成代谢旺盛，核糖体、酶类和ATP的合成加快，易产生诱导酶。 对不良环境敏感， 延滞期出现的原因 重新调整代谢，合成生长所必需的酶类、辅酶或某些中间代谢产物，以适应新的环境而出现生长的延滞期。 也就是为细胞的生长作准备。 影响延滞期长短的因素 菌种 接种龄 指接种物（inoculum）的生长年龄，指处于生长曲线中的阶段。对数期接种延滞期短。 接种量 接种量大，延滞期短。工业发酵一般以种子：发酵培养基＝1：10比例接种。 培养基成分 发酵培养基与种子培养基成分差别越大，延滞期越长。 指导生产的意义：如何缩短发酵的延滞期 以对数期的菌体作种子菌 对数期的菌体生长代谢旺盛，繁殖力强 对数期的菌体抗不良环境和噬菌体的能力强。 适当增大接种量。 接种量大，延滞期短，接种量小，延滞期长。 一般采用3%~8%的接种量，最高不超过1/10。 培养基的成分 在种子培养基中加入生产培养基的某些营养成分，使种子培养基尽量接近发酵培养基，微生物在天然培养基中比在组合培养基中生长快。  （2）对数期（logarithmic?phase） 又叫指数期（Exponential Phase） 指在生长曲线中，紧接着延滞期后的一段细胞数以几何级数增长的时期。 对数期的特点： 菌体细胞生长的速率常数R最大，分裂快，代时短。 代时（generation?time，G）：又称世代时间、增代时间，是指细胞每分裂繁殖一次所需的时间。 细胞处于平衡生长（balanced growth），菌体在培养基中分布均匀。 菌体内酶系活跃，代谢旺盛，菌体数目以几何级数增加，群体的形态与生理特征最一致，抗不良环境的能力强。 指数期的重要参数 繁殖代数