亚非马蜂溶血肤基因和增强…….pdfVIP

业生物技术学报 Journal of Agricultural Biotechnology 2006,14 (1): 102~ 106 ·研究论文· 亚非马蜂溶血肽基因与增强型绿色荧光蛋白基因 融合在昆虫细胞中的表达* 1,2 1 1 1 婉君 杨章女 张传溪 ** 程家安 ** (1. 浙江大学应用昆虫学研究所，杭州310029 ；2.上海交通大学资源环境科学系，上海201101) ： 摘要 构 亚非马蜂( )溶血肽基因重组转移载体pBacHT- ，转化含穿梭载体Bacmid 的受体菌 (DH 10Bac) 中，得重组穿梭载体Bacmid- , 再用Lipofectin 介导其DNA 转染粉纹夜蛾( ) 胞系 Tn。SDS分析表明，感染Bacmid- 的Tn-5B 1-4 细胞的表达产物在约为34 kD 处出现特异性条带，表达 量约占细胞总蛋白的3%。Western blot 显示表达产物具有良好的免疫活性。感染Bacmid- 的细胞表达时相动态分析 进一步表明，与增强型绿色荧光基因融合的亚非马蜂溶血肽基因的重组病毒已在昆虫细胞中进行了成功地表达, 感染后72 h 表达量可达最高水平。 ： ；表达 关键词 亚非马蜂；蜂毒溶血肽；增强型绿色荧光蛋白基因 中图分类号: S188 文献标识码: A 文章编号: 1006-1304(2006)01-0 102-05 Expression of the Melittin Gene of Fused with Enhanced Green Fluorescent Protein Gene in Insect Cells 1,2 1 1 SHI Wan-Jun YANG Zhang-Nv ZHANG Chuan-Xi ** CHENG Jia-An ** A cDNA fragment encoding melittin from the venom gland of female was cloned into pBacHTeGFPT to construct the recombinant donor plasmid pBacHT- . The donor plasmid was then transformed into (DH 10Bac) to form the recombinant, Bacmid- . Bacmid DNA was further transfected into Tn-5B 1-4 cel