细胞拆分重组与克隆技术2.pptVIP

细胞重组与克隆技术 细胞拆分技术与细胞重组 细胞拆分 细胞分离技术（P229） 根据细胞特性分离 细胞大小 细胞密度 细胞表面电荷 细胞表面标志 细胞中一个或多个成分的荧光强弱 细胞对其他介质的吸附作用 细胞分离技术（P229） 梯度沉降分离法 等密度沉降分离法 流式细胞仪分离法 细胞器的分离技术 细胞器的分离有时需要将组织细胞破碎，然后根据待分离的细胞器的理化特性，选择适当的分离方法。一般采用差速离心或密度梯度离心的方法达到分离细胞器的目的。 杆状玻璃匀浆器法 该匀浆器由一根端部表面磨砂的玻璃杆和一个内壁磨砂的玻璃套管组成。使用时，先用锋利的刀片把组织块切碎，然后把碎块加入套管中，用力使玻杆移动使组织细胞破碎。 高速组织捣碎机法（P230） 使用时将4℃预冷的组织碎块或细胞悬液加入捣碎机的梅花玻璃杯中，至杯体积的1/3即可盖好玻璃杯盖，固定好带杆叶片刀，缓慢调整旋转速度，一般开机数十秒后，组织细胞即可被高速旋转的叶片刀破碎。但不宜时间过长，以防高速旋转产生热而导致分离物中的活性物降解，用冷却水降温更好。 超声波处理法（P230） 超声波发生器能产生高强度的超声信号，经换能器传送至与之接触的溶液中，由声波形成冲击和振动而产生剪力，致使细胞破碎，动物组织肝、肾、胸腺、淋巴结、腹水细胞、红细胞、体外培养的细胞均可在短时间内破碎，因超声时可产热，应注意冰浴冷却，生物大分子如核