实验7-皮肤刺激实验-20121129.pdf

实验八 皮肤刺激实验 皮肤毒作用的类型： 接触性皮炎、光毒性、光敏作用、皮肤 肿瘤、荨麻疹、异常色素、痤疮等。 皮肤毒性检测方法： 皮肤黏膜刺激试验、皮肤致敏和光敏试 验、皮肤接触性荨麻疹试验、皮肤致癌 试验等。 皮肤刺激性： 皮肤涂敷受试物后局部产生的可逆性炎 性变化。刺激是不涉及免疫学机制的一次、 多次或持续与试验材料接触所引起的局部炎 症反应。 皮肤变态反应（过敏性接触性皮炎）： 皮肤对一种物质产生的免疫源性皮肤反 应。在人类这种反应可能以瘙痒、红斑、丘 疹、水疱、融合水疱为特征。动物的反应不 同，可能只见到皮肤红斑和水肿。 化妆品卫生规范 中华人民共和国卫生部 2007.01 规定化妆品原料的检测一般需进行下列毒理学试验： （1）急性经口和急性经皮毒性试验； （2）皮肤和急性眼刺激性/腐蚀性试验； （3）皮肤变态反应试验； （4）皮肤光毒性和光敏感试验（原料具有紫外线吸收特性需做）； （5）致突变试验（至少应包括一项基因突变试验和一项染色体畸变试 验）； （6）亚慢性经口和经皮毒性试验； （7）致畸试验； （8）慢性毒性/致癌性结合试验； （9）毒物代谢及动力学试验*； （10）根据原料的特性和用途，还可考虑其它必要的试验。 实验目的： 1.确定和评价化学物对哺乳动物皮 肤局部是否有刺激作用及其程度。 2.了解化妆品原料及其产品安全性 毒理学检测方法。 3.确定重复接触化妆品及其原料对 哺乳动物是否可引起变态反应及其 程度。 实验原理： 1.将受试物一次（或多次）涂敷于受试动物 的皮肤上，在规定的时间间隔内，观察动物 皮肤局部刺激作用的程度并进行评分。 2.采用 自身对照，以评价受试物对皮肤的刺 激作用。 3.急性皮肤刺激性试验观察期限应足以评价 该作用的可逆性或不可逆性。 实验材料： 剃毛器、剪毛剪、记号笔、 医用胶带、称量纸、洗瓶、大烧杯、 棉签、静脉注射针头（5号或7号）、 一次性静脉注射器、麻醉剂（戊巴比 妥钠或其他）、兔子保定器等。 实验方法： ◆ 实验动物和饲养环境 多种哺乳动物均可被选为实验动物，首选白 色家兔（皮肤变态反应实验多选用豚鼠）；应使 用成年、健康、皮肤无损伤的动物，雌性和雄性 均可，但雌性动物应是未孕和未曾产仔的；实验 动物至少要用4只，如要澄清某些可疑的反应则需 增加实验动物数；实验动物应单笼饲养，试验前 动物要在实验动物房环境中至少适应3d时间；实 验动物及动物房应符合国家相应规定；选用常规 饲料，饮水不限制，豚鼠需注意补充适量Vc。 ◆受试物 液体受试物一般不需稀释，可直接使用原液； 固体试物，应将其研磨成细粉状，并用水或其它 无刺激性溶剂充分湿润，以保证受试物与皮肤有 良好的接触；使用其它溶剂，应考虑到该溶剂对 受试物皮肤刺激性的影响；需稀释后使用的产品 ，先进行产品原型的皮肤刺激性试验，如果试验 结果显示中度以上刺激性，可按使用浓度为受试 物再进行皮肤刺激性试验。 ◆急性皮肤刺激性试验步骤： ①试验前约24h，将实验动物背部脊柱两侧 毛剪掉，不可损伤表皮，去毛范围左、右各 约3cm×3cm。 ② 取受试物约0.5mL（g）直接涂在皮肤上， 然后用二层纱布（2.5cm×2.5cm ）和一层玻 璃纸或类似物覆盖，再用无刺激性胶布和绷 带加以固定。另一侧皮肤作为对照。采用封 闭试验，敷用时间为4h。对化妆品产品而言, 可根据人的实际使用和产品类型，延长或缩 短敷用时间。对用后冲洗的化妆品产品，仅 采用2h敷用试验。试验结束后用温水或无刺 激性溶剂清除残留受试物。 注意：如怀疑受试物可能引起严重刺激或腐 蚀作用，可采取分段试验，将三个涂布受试 物的纱布块同时或先后敷贴在一只家兔背部 脱毛区皮肤上，分别于涂敷后3min、60min 和4h 取下一块纱布，皮肤涂敷部位在任一 时间点出现腐蚀作用，即可停止试验。 ③ 于清除受试物后的1、24、48和72h 观察 涂抹部位皮肤反应,按表1进行皮肤反应评分, 以受试动物积分的平均值进行综合评价，根 据24、48和72h 各观察时点最高积分均值， 按表2判定皮肤刺激强度。 ④ 观察时间的确定应足以观察到可逆或不可 逆刺激作用的全过程，一般不超过14d。 表1：皮肤刺激反应评分