PCR技巧.docVIP

聚合酶链式反应（PCR）技术是现代分子生物学核心技术之一，研究提高PCR扩增效率的方法具有重要意义。传统提高PCR扩增效率的方法具有较多局限性，使得PCR扩增仍不能达到理想的效果。随着纳米技术的发展，纳米材料具有特殊的表面效应和尺寸效应，表面能进行多种修饰，易与生物大分子蛋白质、核酸等相互作用，对生物分子的结构和功能产生特别的影响。研究利用纳米材料来提高PCR扩增效率的技术和方法，具有非常重要的理论意义和应用价值。本文引用文献41篇，综述了近年来纳米材料在PCR体系中应用的现状，并展望了今后纳米材料在PCR体系中应用的发展方向及其前景。 关键词 聚合酶链式反应；纳米材料；特异性；扩增效率；评述 Application Progresses of Nanomaterials on Polymerase Chain ReactionLI Na，QIAO Guang-Ming，ZHUO Lin-Hai，TＡＮＧ Bo*(College of Chemistry，Chemical Engineering and Materials Science，Key Laboratory of Molecular and Nano Probes，Ministry of Education，Engineering Research Center of Pesticide and Medicine Intermediate Clean Production，Ministry of Education，Shandong Normal University，Jinan 250014)Abstract Polymerase chain reaction possesses very important academic and application meanings to study the ways and technologies of improving the efficiency of PCR based on nanomaterials.In this review，recent application status of nanomaterials on PCR was summarized with 41 references.Particularly，the developing trends and prospects in the future were also discussed. Keywords Polymerase chain reaction； Ｎanomaterials； Ｓpecificity； Ａmplication efficiency； Ｒeview 1 引言引言引言引言 1983年Mullis发明了聚合酶链式反应(PCR)[1]，并因此荣获1993年诺贝尔化学奖。PCR可使目的DNA分子的合成量呈指数增长，因此微量的遗传物质在数小时内即能扩增数百万倍[2，3]达到检测水平，进而可进行测序[4]、DNA探测[5，6]、基因分析[7~9]、食品检验[10，11]、环境监测[12，13]等。PCR技术具有特异、敏感、快速、易自动化等突出优点，彻底改革了分子遗传学，成为现代生物学和药物科学最流行的技术之一，与克隆、DNA序列分析方法构成了整个现代分子生物学研究工作的基础。尽管PCR已发展成为一项相当成熟的技术，但在实际操作中，PCR扩增始终存在一些难以克服的问题，如假阴性、假阳性、非特异性扩增以及片状拖带或涂抹带等，寻找解决PCR中这些问题的方法至关重要，通常的办法有向PCR体系中添加各种增效剂[14，15]，优化PCR体系的各种参数[16，17]，改进PCR的扩增策略[18，19]等，这些方法虽然在一定程度上提高了PCR的特异性、产量以及效率，但是并未彻底解决上述难题，PCR扩增仍达不到理想的预期效果。近年来，人们试图从新兴学科与技术中寻找优化PCR的方法。纳米生物技术由于其独特的优势性越来越受到人们的关注[20]。尺寸小于100 nm（与生物分子的尺寸相当）的纳米材料在生物医学中得到了广泛的应用[21，22]，人们已将多种纳米材料引入传统的PCR技术中。 2 纳米材料对PCR体系的影响 2.1 金纳米粒子对PCR体系的影响 Li等[23]将10 nm的金纳米粒子作为一种新型的优化剂添加到PCR体系中，考察了金纳米粒子对PCR特异性的影响。实验结果发现，当金纳米粒子的浓度介于0.4～0.8 nmol/L之间时，随着金纳米粒子浓度的不断增高，PCR的特异性越来越好；但当金纳米粒子浓度大于1.0 nmol/L时，PCR的特异性又被抑制。而且，加入