RNAi技术与胶质瘤的治疗.pptVIP

RNA干扰与胶质瘤的基因治疗 （RNA i）;;;内容提要;摘要;概述;;一、基本原理;; (RISC)——RNA诱导沉默复合体 si RNA （+Dicer酶 ） ↓ 识别 靶基因mRNA ↓ mRNA与si RNA正义链交换 ↓ Dicer酶+siRNA+mRNA（即RISC+mRNA ） Dicer酶即可切割靶基因mRNA →抑制表达;;二、靶点设计;三、RNA i实施手段;（二）重组载体 以DNA为模板的 RNA聚合酶IIIU6 和 H1 启子引导的表达siRNA真核表达载体→哺乳动物细胞内表达产生siRNA 方式： ①双启动子分别表达正义链和反义链，然后在胞内结合形成siRNA ②单启动子引导19nt的目的序列及其反向的重复序列来表达小发夹状RNA（small hairp in RNA，shRNA）——RNAi效应相对更强 ;重组载体的优点： RNAi的合成过程转移至胞内进行，效率大大提高 排除RNAase的干扰，延长siRNA的半衰期 pSUPER-retro能够整合到靶细胞的基因组，长期稳定地抑制基因表达，在原代细胞也能实现高效率的基因转移。 pSUPER-retro(逆转录病毒载体);四、RNA i技术的优势;⑵基因治疗方面的潜能 ——利用基因家族高同源性保守序列起作用 因为同一基因家族一般都具有高同源性的保守序列，所以 ①可以设计针对这一保守序列的siRNA分子，只导入一种表达siRNA载体即可产生多个基因同时切除的效果 ②同时导入多种表达的siRNA载体，将多个序列各异癌基因同时敲除;五、RNA i在胶质瘤研究中的应用;㈡作用于表皮生长因子受体（EGFR） EGFR的扩增和突变在星形胶质瘤中较常见，其中缺失外显子2-7的Delta EGFR是主要变异形式，并且Delta EGFR在正常组织中不存在。 针对Delta EGFR特异的外显子1和外显子8交界序列的siRNA ↓ Delta EGFR表达明显下降 ↓ 凋亡增加，细胞周期停滞在G2/M 同时证实了Delta EGFR作为胶质瘤治疗靶点的价值 Delta EGFR的mRNA被切割，导致其低表达或不表达→抑癌？;㈢降低人类胶质瘤细胞对神经酰胺的耐药性 耐药机制：凋亡蛋白抑制剂（Inhibitors of apoptosis protein，IAPs）诱导caspase-7的抑制作用，特别是X染色体相关联的凋亡蛋白抑制剂（XIAP）的抑制作用。 siRNA作用：靶向XIAP的siRNA发挥基因敲低作用，有效逆转U251SP、T98G、SKAO2和U251MG等胶质瘤细胞对神经酰胺的耐药性 神经酰胺;㈣影响肿瘤细胞的转移侵袭 利用细胞内发夹装小RNA序列的靶向uRNA和CB重组质粒载体转染人体胶质瘤细胞后，特异性的肿瘤侵袭力和血管形成能力下降。 实验中发现，对颅内预先接种的人胶质瘤瘤内注射重组RNA i质粒后瘤体也有缩小，与对照组相比较，实验组的uPAR和CB表达水平明显下降。