大鼠心肌干细胞体外分离培养.pdf

维普资讯 血栓与止血学2006年第 l2卷第5期 · 2Ol· 大鼠心肌干细胞的体外分离培养 吴 昊，陆东风 ，黄 瑕，李 妍 (广州医学院第二附属医院心内科 广州，510620) 摘 要： 目的 自大鼠心脏中分离得到心肌干细胞，体外培养并观察其向心肌细胞的分化能力。方法 无菌操 作取下新生鼠心脏，经反复消化后 ，弃去消化液 ，将所得残余组织块进行培养，视生长情况进行传代 (一般 1周左右)。 传代细胞采用不同培养液进行培养，约2周后，镜下可见搏动细胞时 ，分别对原代细胞和传代细胞进行流式细胞鉴定及 免疫组化染色。结果 从消化后残留心肌组织块中成功培养出原代细胞 ，经流式细胞仪鉴定其表型为c—kit，CD31阳 性 ，CD34，CD45、心肌钙蛋白T(CardiacTroponinT，CTnT)阴性。细胞经传代培养2周后，单个细胞开始出现搏动，亦 可见成团细胞的同步收缩。再次流式鉴定的结果，表型有所改变，主要是 CD31转阴性，CTnT阳性，而c—kit、CD34、CD 45无明显变化。免疫组化证实，原代细胞并不表达心肌细胞结构蛋白CTnT，而在部分传代细胞 内可见CTnT表达。结 论 成功 自心脏中分离得到一类表型为c—kit、CD31 、CD34～、CD45一、CTnT一的细胞，经使用不同成份培养液传代培 养，可分化可搏动的心肌细胞，并表达心肌结构蛋白。 关键词： 心肌于细胞； 分离和培养； 流式细胞术； 免疫组化 [中图分类号]Q25 [文献标志码]A [文章编号]1009—6213(2006)05—201—05 TheIsolation．Cultureand Identification ofCardiacStem CellsinVitrofrom Neonatal SD Rat． WUHao，LU Dong—feng ，HUANGJing，LIYan (DepartmentofCardiology，theSecondAffilitedHospital，GuangzhouMedicalCollege，Guangzhou 510260，China) Abstract： Objective Tofindaneffective，maturemethodwhichcanalsoberepeatedeasilytoisolate andcultureCSCsinvitro。andthenmadethem differentiateintobeatingcardiomyocytes．M ethods Isolated myocardialtissuewasgetfrom Neonatalrat，andthenwascutinto0．5-1mm pi’eces．digestedtricef0r5min at37(℃with0．2％ trypsinand0．1％ collagenaseIIrespectively．Theremainingtissuefragments．werecul— turedasexplantsinCEM at37℃ and5％ CO，．Afteraboutaweek．alayeroffibroblast—likecellswasgen。 eratedrfom adherentexplants．Thesecellswerepassagedandwereseededatabout1×10。cells／mlinpoly— D—lysine—coatedmulti—wellplatesin cardiosphere—growingmedium．Both flow cytometry