土壤分析.docVIP

土壤微生物的分析测定 土壤微生物（soil microorganism)是指生活在土壤中借用光学显微镜才能看到的微生物。 土壤中占多数的分别是细菌、放线菌、真菌。采样工具 GPS导航仪、取土器、铁铲（锹）、小刀、卷尺、采样袋（布袋、纸袋或塑料网袋）、采样标签、记号笔等。 采集 土壤采自郊外，采集深度0~20cm，采样时先刮去2-3cm厚的表层土，用铁锹挖成一个深20cm的完整垂直剖面，再取宽10cm、厚2cm的土片，采用5点采集法，共采集6个土样，每个土样500g。 取样时先用铁锹铲出一个耕层断面，然后与断面平行取土每个采样点的取土深度及采集数量一致，样品中上层土与下层土的含量相同；取土器入土时要与地面垂直，且保持同一深度。用刀和尺将土片削成宽2cm、厚2cm、长（自上而下）15－20cm的土条，捏碎大块，剔除石砾、植物残体等混杂物。 样品处理 采样多点混合，充分拌匀成为混合土样。每一个混和土样中称取1kg，样品的数量过多时采用四分法除去多余的土壤，即将样品放在干净的平面上，将其碾碎、混匀，并铺成平面四方形，沿对角线将土壤平均分成四份，对角的两份混匀成为一份，取其中一份。如果得到的样品仍然比较多，可以再继续采取四分法处理，一直达到需求的数量为止。 土壤稀释液的制备 取土样10g，放入盛有90ml无菌水并带有10粒无菌玻璃珠三角瓶中，震荡10分钟，制成均匀的土壤悬液，用1支1ml无菌液盛有9ml无菌水的试管中充分混合，再用无菌试管从此试管中再吸取1ml悬液，加入另一盛有9ml的无菌水的试管中，以此类推配10-1、10-2、10、10、10-5、10-6不同稀释度的土壤溶液。 选择性分离 按牛肉膏蛋白胨琼脂培养基的配方()，依次按试剂加入500ml的容量瓶中，加入一定量的无菌蒸馏水，震荡均匀后定容至500ml，将溶液倒入三角瓶内，120℃灭菌20min。灭菌完毕后，待三角瓶温度降至50℃时，在无菌操作台上将溶液倒入。倒时，右手持盛装培养基的三角瓶置于火焰旁，左手将塞拔出，瓶口保持对着火焰，然后用右手手掌边缘与无名指夹住瓶塞，左手拿并将在火焰附近打开，迅速倒入，待冷却。表1 不同稀释度土悬液细菌筛选试管编号 土壤浓度 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 I1 II1 III1 IV1 V1 试管编号 I2 II2 III2 IV2 V2 I3 II3 III3 IV3 V3 于28℃培养7~14d，根据各稀释系列试管中有无细菌得出数量指标，并根据重复数量不同利用三次重复测数统计表查出细菌近似值。 每克干土中细菌数= 2.2 放线菌的分离计数 2.2.1 选择性试管分离 按I号培养基的配方()，I号培养基中加入重铬酸钾溶液，以抑制细菌和霉菌的生长，每100ml培养基加入3%重铬酸钾。按上述方法把培养液倒入试管待冷却。 2.2.2 试管的标记 选取10-6~10-2 5个相连的稀释度，将不同的稀释度悬液分别接种至不同培养基的试管中，每管接悬液1ml，每一稀释度重复3管，不同土壤稀释液细菌分离的培养皿标记如下表2所示： 表2 不同稀释度土悬液放线菌筛选试管编号 土壤浓度 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 A1 B1 C1 D1 E1 试管编号 A2 B2 C2 D2 E2 A3 B3 C3 D3 E3 于28℃培养7~14d，根据各稀释系列试管中有无细菌得出数量指标，并根据重复数量不同利用三次重复测数统计表查出放线菌近似值。 每克干土中细菌数= 2.3 真菌的分离计数 2.3.1 选择性试管分离 按马丁培养基的配方()，表3 不同稀释度土悬液真菌筛选试管编号 土壤浓度 原液 10-1 10-2 10-3 10-4 a1 b1 c1 d1 e1 试管编号 a2 b2 c2 d2 e2 a3 b3 c