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1 原理 浓硫酸(A.R.); 硫酸钾:硫酸铜=3:1(W/W)混匀研成粉末; 40%NaOH溶液:40gNaOH溶于蒸馏水,释至100mL; 2%硼酸溶液:2g硼酸溶于蒸馏水,释至100mL; 混合指试剂:0.1%甲基红乙醇溶液和0.5%溴甲酚绿乙醇溶液,两溶液等体积混合; 0.1mol/L标准HCl溶液:8.3mLHCl定溶至1000mL。 3.1 消化 称0.5黄豆粉样品于消化管中,加入6.4g[硫酸钾:硫酸铜=3:1(W/W)]混合的催化剂,与试样混合均匀,再加入12mL硫酸,置于消化炉上加热,开始小火5min,待样品焦化,泡沫消失后,再加强火力(360-410℃)直至呈透明的蓝绿色,然后再继续加热,至少2 h。 3.2 蒸馏 3.3 滴定 3.4 计算 蛋白质的含量(%)= 4 思考题 * * g 实验四 总氮量的测定 凯氏定氮法 理解与掌握凯氏定氮法测定氮含量的原理,掌握样品消化、蒸馏、吸收和滴定的正确操作方法,智能开启式定氮仪的原理和使用方法 。 实验类型:基础验证型 实验学时:4学时 实验目的 有机物与浓硫酸共热,有机氮转变为无机氮(氨),氨与硫酸作用生成硫酸氨,硫酸氨与强碱作用释放出氨,借蒸汽将氨蒸至酸液中,根据此过量酸液被中和的程度,即可计算出样品的含氮量。 (1) 消化 蛋白质 + H2SO4 (NH4)2SO4 + CO2↑+ SO2↑ + H2O (2) 蒸馏 (NH4)2SO4 + 2NaOH 2NH3↑+ Na2SO4 + 2H2O (3) 吸收: 2NH3 + 4H3BO3 (NH4)2B4O7 + 5H2O (NH4)2B4O7 + 2HCl + 5H2O 2NH4Cl + 4H3BO3 (4) 滴定: 用反应式表示如下: 2 试剂、材料与设备 2.1 主要试剂 粉碎机,研钵,分样筛,分析天平,消化炉,滴定管,容量瓶,智能开启式定氮仪,三角瓶。 2.2 主要设备 2.3 材料:黄豆粉 3 实验方法 消化炉 消化管 将试样消化液冷却,加入50mL蒸馏水,摇匀,冷却,并加入40%NaOH溶液50ml。 在250mL三角接收瓶中加入25mL 2%的H3BO3和2滴混合指示剂,将该瓶套在蒸馏器的接收管上,并且让管口浸没在H3BO3溶液中。 扳动蒸馏托盘架把准备好的消化管固定在托盘架上,按蒸汽键蒸馏6-7min,待接收瓶液面高于150ml时将接收瓶下移,使接收瓶离开液面,继续蒸馏30s,取下接收瓶滴定。 定氮仪 碱 泵 水 泵 进 水 排 水 出 水 用0.1mol/L的盐酸滴定接收瓶内的溶液,滴至溶液由蓝色变成微红色时为止,记下消耗的盐酸的毫升数。 式中:V: 消耗盐酸标准液的体积(mL) V0: 空白实验消耗盐酸标准液的体积(mL) N: 盐酸标准溶液浓度(mol/L) A: 固定值(6.25) 0.014:每毫克当量氮的克数 W: 试样的重量g * g * *
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