实验六硫化氢(H2S)含量的测定.ppt

3.实验步骤 (1)H2S的提取 (2) H2S的测定 (3)标准曲线的制作 Ⅱ亚甲蓝法 1.实验原理 在FeCl3(作为氧化剂)存在的强酸性条件下，硫化氢(H2S)与N,N-二甲基对苯二胺反应生成蓝色的亚甲蓝，亚甲蓝在667nm处有最大吸收,故可根据亚甲蓝生成的量来计算植物组织中H2S的含量。此法专一性和灵敏性好，检测极限低于 5μmol/L,理想条件下可达到 10 nmol/L。 2.材料、仪器设备及试剂 (1)材料 取热激0h、热激4h并恢复4h和高温胁迫17h的玉米幼苗。 (2)仪器设备 紫外可见分光光度器，高速冷冻离心机，微量加样器，分析天平，水浴锅，研钵，量筒，吸量管，刻度试管，试管架，容量瓶，药勺。 (3)试剂 H2S提取液(100mmol/L磷酸钾缓冲溶液(ph7.4)，内含10mmol/LEDTA和0.25%醋酸锌)；50 mmol/L FeCl3(用1.2 mol/L HCl配置)；5mmol/LN,N-二甲基对苯二胺(用7.2mol/L HCl配置)；10μmol/LNa2S。 3.实验步骤 (1)H2S的提取 (2) H2S的测定 (3)标准曲线的制作 4.结果计算 从标准曲线中查出相应的H2S浓度，求H2S的含量(μmol/g)。公式如下： H2S的含量(μmol/g)=(C/ω)×(Vt/1000) 式中：C为标准曲线上查出的H2S浓度； Vt为提取液的总体积，即3mL； ω为材料的鲜重。 5.注意事项 离心后的上清液应定容到一个准确的体积，以便于含量的计算。 * * 实验六 硫化氢（H2S）含量的测定（第六组：杨如春、农春响、李太蓉、陈登卫、何再炳） I 二六硝基苯甲酸法 1.实验原理 硫化氢（H2S）目前被认为是植物中一种新的信号分子，参与植物细胞的氧化还原平衡等多种生理过程。H2S易溶于水，1molH2S与1mol二六硝基苯甲酸（DT-NB）反应后，形成2mol黄色产物——硫硝基苯甲酸，此物质在412nm处有最高吸收峰，并且在此波长处的毫摩尔吸光系数为￡412=27.2Lmmol-1.cm-1，因此可根据硫硝基苯甲酸生成的量来计算植物组织中H2S的含量。实验中常用的H2S供体有NaHS、Na2S、GYY4137等，它们溶于水后可释放出H2S，H2S在水中溶液中常解离为H+、HS-、S2-。 2.材料、仪器设备及试剂 (1)材料 取热激0h、热激4h并恢复4h和高温胁迫17h的玉米幼苗。 (2)仪器设备 紫外可见分光光度器，高速冷冻离心机，微量加样器，分析天平，水浴锅，研钵，量筒，吸量管，刻度试管，试管架，容量瓶，药勺。 (3)试剂 H2S提取液(100mmol/L磷酸钾缓冲溶液(ph7.4)，内含10mmol/LEDTA和0.25%醋酸锌)；50 mmol/L FeCl3(用1.2 mol/L HCl配置)；5mmol/LN,N-二甲基对苯二胺(用7.2mol/L HCl配置)；10μmol/LNa2S。 热激0h(热激前)黄化玉米幼苗 热激4h并恢复4h黄化玉米幼苗 48℃高温胁迫17h黄化玉米幼苗 0.5g 0.5g 0.5g 加预冷的提取液1mL和少许石英砂，充分冰浴研磨 转入离心管离心15min(4℃下12000×g),取上清液 取200μL上清液 加入提取液3760μL，摇匀 再加40μL20mmol/L DTNB ,摇匀2min 于412nm处测定吸光度A412 10μmol/L NaHS（mL） 0 2 4 6 8 10 蒸馏水(mL) 10 8 6 4 2 0 各取1mL于6支试管中 分别去200μL，加入提取液3760μL，摇匀 再加入40μL20mmol/L DTNB ，再摇匀2min 于412nm处测定吸光度A412 以NaHS浓度为横坐标，A412为纵坐标，建立标准曲线或回归方程 4.结果计算 从标准曲线中查找出相应的H2S浓度，用μmol/g表示H2S含量。 H2S含量（μmol/g）=C/w×(Vt/1000) 式中：C为标准曲线上查出的H2S浓度； Vt为提取液的总体积，即1mL； W为材料的鲜重（g）。 5.实验注意事项 (1)离心