Rheb基因及Rheb突变基因重组腺病毒载体的构建及 ….docVIP

Rheb突变的构建 【摘要】 目的 构建携带Rheb（WT）和Rheb突变组腺病毒载体验证其携带的Rheb和Rheb突变基因在MCF-7细胞中的表达及其对细胞的作用。方法 采用细胞内同源重组法构建携带Rheb和Rheb突的重组腺病毒pacAd5 CMV-Rheb，PCR法检测病毒上清将病毒上清感染MCF-7细胞后Western blotting检测Rheb及下游产物表达。重组腺病毒感染细胞1并观察细胞情况。结果 酶切、测序及PCR表明构建的重组腺病毒携带Rheb和Rheb突变基因。重组腺病毒体外感染MCF-7细胞WB检测到腺病毒感染的MCF-7细胞内Rheb蛋白表达较对照组明显增高S6及