第三章动物细胞制药part2.pptVIP

动物细胞的培养条件 动物细胞培养 细胞培养是指离体细胞在无菌条件下分裂、生长，在整个培养过程中不出现分化，不再形成组织。 组织培养是指动物体系的某种组织，在体外培养时细胞一直保持原来已分化的特征，该组织的结构和功能持续不发生明显变化。 原代培养是指直接从有机体得到的组织或将其分散成细胞后开始的培养。 传代培养或再培养是转移部分初代培养物到新鲜培养基中的培养。 动物细胞培养与微生物培养区别 动物细胞无细胞壁，且大多数哺乳动物附着在固体或半固体的表面才能生长。 对营养的要求较高，往往需要多种氨基酸、维生素、辅酶、核酸、嘌呤、激素和生长因子等，其中很多成分系用血清、胚胎浸出液等提供，在很多情况下还需加入10%的胎牛或新生牛血清。 动物细胞对环境敏感，包括pH、溶氧、温度、剪切应力都比微生物有更严的要求，一般须严格的检测和控制。 动物细胞生长缓慢，对环境条件要求严格。不仅需要严格的防污染措施，同时还要用空气、氧、二氧化碳和氮的混合气体进行供养和调节pH。 原代培养：单个细胞 十代左右 传代培养：原代培养细胞 40~50代左右 细胞株：10到40、50代的细胞 遗传物质没发生改变 细胞系：超过50代的细胞， 遗传物质发生改变，可无限增值 注意界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系 已有商品市售无血清培养基主要游戏书3类： 动物细胞培养方法和操作方式 依培养器和方式： 从生产实际分为： 培养技术 动物细胞大规模培养与实验室培养相比，培养条件更严格，控制难度更大，其培养方法可概括为： 悬浮培养 固定化培养 微载体（Microcarrier）培养法 培养技术 一、单层静置贴壁培养法： 转管及转瓶培养和旋转圆柱管培养 二、悬浮培养法： ⑴ 翻滚培养 ⑵ 旋转培养 ⑶ 电磁搅拌培养 ⑷ 振荡培养 ⑸ 振动器培养 ⑹ 滋养器装置 ⑺ 发酵罐培养（包括搅拌生物反应器和气动发酵器培养） 三、固定化培养法： ㈠ 多层培养：1.多层繁殖期；2.多层托盘式装置；3 Optical培养系统； 4.塑料软片培养系统； 5.Heli-cel薄膜卷带式培养 ㈡ 微载体培养 ㈢ 中空纤维灌注培养法 ㈣ 玻璃珠床培养 ㈤ 包被细胞培养（如图） 培养技术 细胞大量培养的类型和方法 一、大规模培养系统的类型 批量换液 半连续批量培养系统 用连续灌注法 连续-流动培养系统（如图23-3） 培养技术 细胞大量培养的类型和方法 二、大规模生产细胞的方法 ㈠ 单层静置贴壁培养法： Roux瓶/方瓶 转管及转瓶培养 旋转圆柱管培养 培养技术 细胞大量培养的类型和方法 二、大规模生产细胞的方法 ㈡ 固定化培养法： 将细胞限制或定位于特定空间位置的培养技术称为细胞 固定化培养。 多层培养法 ⑴ 多层繁殖器在玻璃圆管中(大方缸）有多层玻璃隔板 支持细胞贴附生长。 ⑵ 钛碟装置多层圆柱状不锈钢（带有观察条件）罐内或 玻璃瓶内装入钛碟圆盘支持细胞贴服生长。可改变 位置和旋转。 培养技术 细胞悬浮培养法 动物细胞在培养液中呈悬浮状态生长繁殖的培养方 法谓之悬浮培养法。其培养方式有 批量法 半连续法 连续法 适用于培养确立细胞株、杂交瘤细胞、肿瘤细胞、 血液细胞及淋巴组织细胞，用于大量生产疫苗、 α-干扰素、白介素等药品。 此法不适于包括二倍体细胞在内的正常组织细胞的培养。 培养技术 细胞悬浮培养法的优点 可连续收集部分细胞进行移植继代培养，传代时无需消化分散，免遭酶类、EDTA及机械损害。 细胞收率高，并可连续测定细胞浓度，还有可能实现大规模直接克隆培养。 培养技术 细胞悬浮培养法的优点 培养过程中，为确保细胞呈单颗粒均匀悬浮状态， 需采用搅拌或气升式反应器，以较低搅拌速度及 一定速度通入含5%的CO2无菌空气，保持细胞悬浮态 并维持培养液溶解氧。 此外不同细胞悬浮条件亦异，为使细胞不直凝集、 成团或沉淀，在配制培养基的基盐溶液中不加钙 和镁离子。间歇或连续更换部分培养液，可维持 pH值，若使用HEPES缓冲盐溶液时尚可不必连续 通入含5%的CO2空气。 培养技术 悬浮培养的反应器 气升式反应器 笼式通气搅拌罐 中空纤维管 陶质矩形通