22动物细胞工程1（何2013）.pptxVIP

2.2 动物细胞工程 这只鼠身上的“人耳”是我国科学家曹谊林教授利用细胞工程技术复制出来的 动物细胞工程 常用技术手段： 动物细胞培养(基础)、 动物细胞融合、 单克隆抗体、 动物细胞核移植等 一、动物细胞培养 概念：动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞, 放在适宜的培养基中,让细胞生长增殖. 配制细胞悬浮液 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 细胞培养（原代培养） 取幼龄动物器官和组织 剪碎 分散组织细胞 几个问题： 1.为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？ 2.胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？用胃蛋白酶可以吗？ 3.胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题？ 4.动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？ 胚胎组织或幼龄动物的组织或器官分裂、增殖旺盛. 胃蛋白酶和胰蛋白酶最适pH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适pH较接近。 能，注意时间的控制。 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，产生细胞群，不能发育成新的动物个体 一、动物细胞培养 概念：动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞, 放在适宜的培养基中,让细胞生长增殖. 培养过程： 配制细胞悬浮液 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 细胞培养（原代培养） 传代培养 取幼龄动物器官和组织 剪碎 分散组织细胞 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 原理：细胞增殖（有丝分裂） 结果：细胞群，细胞产物 无限传代 少数 细胞贴壁 接触抑制 细胞株 细胞系 一、动物细胞培养 原代培养：从机体取出后初次培养细胞到10代左右。 传代培养：原代细胞分装到多个培养瓶中继续培养。 细胞株：培养10代到40、50代细胞，遗传物质未改变。 细胞系：培养大于50代细胞，遗传物质改变，无限增殖。 动物细胞生长特性：细胞贴壁、接触抑制 培养条件 无菌、无毒 消毒、灭菌 抗生素 定期更换培养液，清除代谢废物 营养 合成培养基：葡萄糖、氨基酸、生长因子、无机盐、 （动物血清或血浆） 温度和pH 36.5±0.5℃，7.2---7.4 气体 95%空气，5%CO2 动物细胞培养液的主要成分较植物组织培养培养基有何独特之处？ 维持培养液的PH 动物细胞培养技术的应用 （1）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、 单克隆抗体等。 （2）健康细胞的培养：组织移植、 基因工程的受体细胞 （3）用于检测有毒物质 （4）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据 接触抑制 细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。 贴壁培养：悬液中分散的细胞很快贴附在瓶壁上生长繁殖，要求培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 细胞贴壁与接触抑制 比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 原理 培养基性质 培养基特有成分 培养结果 培养目的 细胞的全能性 细胞增殖 固体培养基 液体培养基 蔗糖 植物激素 葡萄糖 动物血清 植物体 细胞株、细胞系 快速繁殖、培育无病毒植株 获得细胞或细胞分泌蛋白 植物细胞和动物细胞培养的比较 概念：将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。 用核移植的方法得到的动物称为克隆动物. 细胞分化程度高，恢复全能性难。 二、动物体细胞核移植技术和克隆动物 细胞分化程度低，易恢复全能性。 为什么受体细胞选择去核的卵母细胞？ 卵母细胞的细胞质中含有促进供体细胞核表达全能性的物质。 细胞核移植过程 细胞核移植 胚胎移植 细胞拆合技术 多莉羊的培育过程 1.克隆高产奶牛 高产奶牛体细胞离体培养 去核MⅡ卵母细胞 重组细胞 电刺激 重组胚胎 代孕母牛的子宫 克隆奶牛 （显微注射法） （显微操作去核法） 物理或化学方法激活 １.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？ 使核移植动物的遗传物质全部来自有利用价值的动物提供的细胞. ２.用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，为什么？ 10代以内的细胞一般保持正常二倍体的核型，未发生突变. 思考: 3.体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？ 不是，绝大部分DNA来自供体细胞核，但细胞质DNA（如线粒体DNA）来自受体卵母细胞 克隆是指来自同一个祖先、经过无性繁殖所产生相同的分子、细胞的群体或遗传学上相同生物个体。