22第二十二章基因结构与功能分析.pptxVIP

生物化学与分子生物学;第二十二章 基因结构与功能分析技术 ;;第一节 基因结构分析技术 ;一、基因一级结构解析技术 ;（一）双脱氧法和化学降解法是两种常规的DNA测序方法 ;Maxam-Gilbert化学降解测序法 ;（二）全自动激光荧光DNA测序技术的原理基于Sanger双脱氧法 ;（三）焦磷酸测序是一种基于发光法测定焦磷酸的测序技术 ;（四）循环芯片测序被称为第二代测序技术 ;基本流程： ;（五）单分子测序技术被称为第三代测序技术 ;二、基因转录起点分析技术 ;（二）用5?-cDNA末端快速扩增技术鉴定TSS ;（三）用数据库搜索TSS ;三、基因启动子结构分析技术 ;（二）用核酸-蛋白质相互作用技术分析启动子结构 ;（1）用核酸酶进行足迹分析 ;（2）用化学试剂进行足迹分析 ;2. 用电泳迁移率变动分析和染色质免疫沉淀技术鉴定启动子 ;（三）用生物信息学预测启动子 ;2. 预测启动子的其他结构特征 ;四、基因编码序列分析技术 ;（二）用RNA剪接分析法确定基因编码序列 ;（三）用数据库分析基因编码序列;五、基因拷贝数分析技术 ;第二节 基因表达产物分析技术 ;一、通过检测RNA而在转录水平分析基因表达 ;（一）用核酸杂交法检测RNA表达水平 ;3. 用原位杂交进行RNA区域定位 ;（二）用PCR技术检测RNA表达水平 ;（三）用基因芯片和高通量测序技术分析RNA表达水平 ;二、通过检测蛋白质/多肽而在翻译水平分析基因表达 ;（三）用免疫组化实验原位检测组织/细胞表达的蛋白质/多肽 ;（五）用蛋白质芯片和双向电泳高通量分析蛋白质/多肽表达水平 ;蛋白质芯片可用于检测组织∕细胞来源的样品中蛋白质的表达谱；其精确程度、信息范畴取决于芯片上已知多肽的信息多寡。 ;第三节 基因的生物学功能鉴定技术;一、用功能获得策略鉴定基因功能 ;（一）用转基因技术获得基因功能 ;（二）用基因敲入技术获得基因的功能 ;基因敲入是基因打靶（gene targeting）技术的一种。基因打靶是一种按预期方式准确改造生物遗传信息的实验手段。除基因敲入外，基因打靶还包括基因敲除、点突变、缺失突变、染色体大片段删除等。 基因打靶与转基因技术均可用于基因功能研究，但二者的最大区别就是???因打靶能去除和/或替换生物体内的固有基因，而转基因技术则未去除或替换固有基因。目前，基因打靶已成为研究基因功能最直接和最有效的方法之一。 ;二、用功能失活策略鉴定基因功能 ;基因敲除（gene knock-out）属于基因打靶技术的一种，其利用同源重组的原理，在ES细胞中定点破坏内源基因，然后利用ES细胞发育的全能性，获得带有预定基因缺陷的杂合子，通过遗传育种最终获得目的基因缺陷的纯合个体。 ;（二）用基因沉默技术可使基因功能部分缺失 ;三、用随机突变筛选策略鉴定基因功能