GPC 净化系统.pdf

J2 Scientific GPC 凝胶渗透色谱操作指南 应用部分 在您阅读本指南之前，最好先熟悉仪器的操作，并已经掌握软件中文操作手册 中的内容。本指南旨在帮助新用户掌握仪器的维护，方法建立及简单的故障排 除，北京绿绵巨贸科贸有限公司对此指南保留全部权力，任何未经允许的复制、 转载及其他以赢利为目的的商业行为均构成对本公司的侵权。 凝胶渗透色谱原理简介 Accuprep 系统结构及工作框图 注意事项 如何建立适合我的应用的方法 GPC 柱的维护和重新装填 如何备份数据 常见故障分析 凝胶渗透色谱原理简介 凝胶渗透色谱，简称 GPC，是一项比较传统的分离技术，GPC 的柱子由化学惰 性的中空小球组成，利用空间排阻的原理对样品进行分离，详见下图： 小分子通过填料“球” 中的孔 大分子不能从孔中通过 由于小分子化合物会从填料的孔中穿过，而大分子从填料周围的空间穿过，会造 成小分子与大分子之间的行程差距，这样大分子与小分子会先后从柱中馏出，起 到分离的作用。由于这一分离技术不受样品极性的影响，所以对于色谱用户来说， 是一种非常有效解决色谱柱不能分开的样品的手段，尤其是对于脂肪类，蛋白及 色素类大分子干扰物，这些物质对于色谱柱，进样口来说非常危险，而在生物源 样品当中的含量一般又比较高，那么在进行样品分析之前进行一步 GPC 净化就 显得非常必要了。 Accuprep 系统结构及工作框图 Accuprerp TM 是由美国 J2 Scientific 公司生产的凝胶渗透样品净化系统，早在上世 纪 80 年代就引入中国，目前其产品型号主要有手动 AccuPrepJr 和自动 AccuPrep 两种，在 2005 年该公司又推出了新型的 Accuprerp TM MPS 系统，体积进一步小 型化，并能整合计算机及在线浓缩，SPE 等多种技术，更加趋于成熟。由于目前 大家采购这一仪器主要是为了提高效率，本指南将重点放在对自动仪器的介绍方 面。 Accuprerp TM 自动系统 Accuprerp TM 手动系统 AccuPrep MPS 自动系统 AccuPrep MPS +AccuVap GPC 在线浓缩系统 一台完整的 GPC 系统包括几个部分：触摸屏，控制模块，输送泵，检测器，自 动进样器和软件部分。 让我们先来认识一下仪器各部分： 柱子支架 触摸屏 自动进样器 V1/V2 阀 柱切换阀 进样环与进样阀 注射泵 收集架 检测器 输送泵 样品架 工作框图：详见附录1。 注意事项： 1. 样品在进样前必须经 0.45u 的微孔膜过滤。 2. 含水量大的样品在进样前须脱水。 3. 对于快速柱来说，脂肪耐受力为 0.5 克；传统柱为 1 克，那么在进样前请以 此为根据来计算取样量。例如某种样品的脂肪含量为 20%，那么称样量请不 要大于 2.5 克。 4. 在完成前面的样品处理后，如液液萃取，要将样品体系转换成 GPC 所用的 流动相，一般来说除石油醚外，其它基质如丙酮，必须进行这样的转换。而 如果采用乙酸乙酯这类与水互溶的溶剂进行萃取，最好过无水硫酸钠脱水。 如果样品溶剂无法进行转换，那么不同的溶剂总量不得大于进样量的 10%。 5. GPC 柱要求流动相与柱子规格一致，请不要随意变更流动相的比例及组成。 6. 系统主要采用尼龙接头，在连接时适当拧紧即可，过度用力会造成螺纹损坏。 7. PTFE 的连接