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( ) 第 31 卷 分析化学 FENXI HUAXUE 　研究报告 第 8 期 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　 2003 年 8 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 923～927 单分散交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯树脂的制备 及亲合纯化伴刀豆球蛋白A 龚波林　耿信笃 (西北大学现代分离科学研究所 ,现代分离科学省重点实验室 ,西安 710069) 摘　要 　采用一步种子溶胀聚合法制备了颗粒呈单分散的交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯树脂 ,对其环氧基的 ( ) 组成比进行了表征 ,并以氨基葡萄糖为配基 ,首次制备了纯化粗品伴刀豆球蛋白A ConA , Ⅲ 的聚合物基 质的高效亲合色谱柱。配基在树脂上的键合量为 8. 2 mgg ,对纯化后的 ConA 的吸附量为 13. 4 mgg 。使用 该亲合色谱介质成功地从粗品 ConA 中快速纯化了 ConA , 电泳分析显示为一个主要的谱带,纯度从 15 %提 高到 95 % 。 关键词 　单分散交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯微球 ,高效亲和色谱 ,伴刀豆球蛋白A ,纯化 1 　引　　言 蛋白组学研究是继人类基因组研究之后的在生命科学中研究的又一热点1 。人们正在探索各种有 效的从各种杂蛋白质混合物中检测出单个的与人们发病有密切相关的功能蛋白浓度的变化2 ,其中检 测糖蛋白被认为是最为有效途径之一3 。将ConA 作为配基合成的亲合色谱柱则是一种有效的吸附糖 蛋白的方法4 。而ConA 的纯度又是直接影响到这种亲合色谱介质的选择性 , 因此 ,研究一种快速、廉 价的纯化 ConA 的方法就显得很迫切也很重要5 。 亲合色谱具有高选择性 ,可从复杂生物体系中高效、快速地分离出相应的目标产品 ,在生命科学和 生物工程产品分离纯化及分析过程中有广阔的应用前景6 。目前亲合色谱多以 Sepharose 和 Dextran 等 软胶作基质 ,但这些介质存在着受压变形的缺陷 ,限制了其在实际应用中的快速纯化和生产效率7 。硅 胶是高效亲合色谱中最常用的一种基质材料8 ,它有很高的机械强度 ,颗粒均匀 ,柱效率高 ,但这种介质 只适宜pH 在 2～8 的范围内使用 ,而且表面的非特异性吸附也使得它在生化物质的分离、分析中受到一 定限制。合成的高分子聚合物基质交联聚苯乙烯9 ,交联聚甲基丙烯酸酯10 ,11 等树脂 ,具有较好的机械 强度和良好的化学稳定性等优点。 ( ) ( ) 本文选用甲基丙烯酸环氧丙酯 GMA 为单体 ,亚乙基二甲基丙烯酸酯 EDMA 为交联剂 ,采用了一 步种子溶胀聚合法12 制备了单分散交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯树脂 , 以氨基葡萄糖为配基,制备了氨 基葡萄糖高效聚合物亲合色谱填料 ,将其应用于 ConA 粗品的分离纯化 ,取得了满意的结果。 2 　实验部分 2. 1 　仪器和试剂