dTDP-L-鼠李糖生物合成路径的电喷雾多级串联质谱法表征.pdfVIP

质谱学报 Vo l. 37 No.1 第37卷第1期 2016年1 月 j ournal of Chinese Mass Spectrometry Society jan. 2016 dTDP-L-鼠李糖生物合成路径的 电喷雾多级串联质谱法表征 许莹莹1 ，董晨影1 ，周大炜1 ， 2 ， 3 (1.南开大学泰达生物技术研究院，天津 300457 ;2. 天津市微生物功能基因组学重点实验室，天津 300457 ; 3. 南开大学分子微生物学与技术教育部重点实验室，天津 300457) 摘要:本研究以 2-脱氧胸昔-5-二磷酸-L-鼠李糖(dTDP-L-Rha) 生物合成路径涉及的系列酶促反应产 物为研究对象，建立了电喷雾碰撞诱导解离串联质谱(CID-ESI- MS )对罕见单糖生物合成路径的表征 方法。该方法首先通过 ESI-MS 技术分析 2-脱氧胸背-5 -二磷酸-D-葡萄糖 4 ， 6-脱氢酶(RmlB)、 2 -脱 氧胸昔-5 二磷酸 4 额 6 脱氧葡萄糖 3 ， 5 异构酶(RmlC) 和 2-脱氧胸昔-5 人二磷酸-4 嗣F 鼠李糖还原 酶(RmlD)酶活产物的形成，随后应用 CID-ESI-MS 技术对酶促反应终产物 L- 鼠李糖(dTDP-L-Rha) 的 结构进行表征。结果表明:dTDP-L-Rha 的生物合成始于 2 脱氧胸背-5-二磷酸-D-葡萄糖(dTDP-D­ Glc) ，依次涉及 RmlB、 RmlC 和 RmlD三个酶的参与。这与传统的高效液相色谱法(HPLC) 监测、纯化 制备，核磁共振(NMR)及 ESI-MS 结构表征的分析结果一致。该方法简单、灵敏、快速，适用于重要罕见 单糖生物合成路径的表征。 关键词:罕见单糖;dTDP-L- 鼠李糖;生物合成路径;电喷雾串联质谱(ESI-MS/MS) 中图分类号:0657.63 文章编号:1004-2997(2016)01-0017-06 文献标志码:A dOÎ:10. 7538/zpxb. youxian. 2015. 0045 Characterization of Biosynthetic Pathway of the dTDP-L-Rha by Electrospray Ionization Tandem Mass Spectrometry XU Ying-ying 1 , DONG Chen-ying1 , ZHOU Da-wei 1.2 •3 (1. TEDA Institute of Biological Sciences and Biotechnology , Nankai University , Tianjin 300457 , China; 2. Engineering and Research Center for Microbial Functional Genomics and Detection Technology , Tianjin 300457 , China; 3. Key Laboratory of Molecular Micγobiology and Technology , Nankai University , Tianjin 300457 , China) Abstract: Considering the importance of carbohydrate moieties on infectivity and host mimicry , there is a need to better understand the biosynthetic pathways of these unusual