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专题3 植物的组织培养技术 3.1 菊花的组织培养(讲)
一、植物的组织培养的基本过程
【知识点讲解】
1.植物组织培养的原理
(1)细胞分化:个体发育中细胞在形态、结构和生理功能上出现稳定性差异的过程。
根本原因:在特定的时间和空间条件下,基因的选择性表达。
(2)细胞全能性:生物体的细胞,具有使后代细胞形成完整个体的能力。
植物细胞表现全能性条件:离体、营养物质、激素和其他外界条件。
2.植物组织培养的基本过程
试管苗
脱分化(去分化):高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程。
愈伤组织:通过细胞分裂形成的,其细胞排列疏松而无规则,高度液泡化呈无定形状态的薄壁细胞。
再分化:愈伤组织继续进行培养重新分化成根或芽等器官的过程。
【典型例题】
辣椒素作为一种生物碱广泛用于食品保健、医药工业等领域。辣椒素的获得有 I、II途径如下图。有关说法正确的是( )
A.对外植体先后使用70%的酒精和1%的氯化汞溶液严格消毒
B.图中①过程细胞进行的分裂一定是有丝分裂
C.图中获得愈伤组织、脱毒苗和高产细胞群不需要更换培养基
D.I和II途径均表现了植物细胞的全能性
【答案】植物细胞表现出全能性的必要条件是( )A. 给予适宜的营养和外界条件B. 导入其他植物细胞的基因C. 脱离母体后,给予适宜的营养和外界条件D. 将成熟筛管的细胞核移植到去核的卵细胞内【答案】C
二、影响植物组织培养的主要因素
(1)培养材料
①不同植物的影响:不同的植物组织,培养的难易程度差别很大,容易进行无性繁殖的植物也容易进行组织培养。
②同一植物发育状况、保存状况的影响:同一种植物材料的年龄、保存时间的长短等对培养也有影响,幼龄、保存时间短的植物材料容易培养成功。
(2)无菌条件:培养基上有细菌等微生物存在时,它们比植物细胞生长、繁殖得更快,而且它们会产生毒素,使培养的植物细胞很快中毒腐烂,因此在培养过程中要求进行一系列的消毒、灭菌,并且要求无菌操作。
(3)植物激素:在配制好的MS培养基中,常常需要添加植物激素。其中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。
植物组织培养过程中生长素和细胞分裂素重要作用 (1)使用先后顺序与细胞分裂和分化的关系
使用顺序 实验结果 先生长素,后细胞分裂素 有利于分裂但不分化 先细胞分裂素,后生长素 细胞既分裂也分化 同时使用 分化频率提高 (2)用量比例与根、芽的分化
生长素和细胞分裂素比值 结果 比值高时 促进根的分化,抑制芽的形成 比值低时 促进芽的分化,抑制根的形成 比值适中 促进愈伤组织的形成
在菊花的组织培养操作完成了3~4天后,观察同一温室中的外植体,发现有的瓶内外植体正常生长,有的瓶内外植体死亡,你认为外植体死亡的原因不可能是( )
A.接种时培养基灭菌不彻底
B.接种工具灼烧后未待冷却就接种外植体
C.愈伤组织形成初期没有给予充足的光照
D.培养过程中保持温度、pH的适宜,但没有及时调整各种营养物质、激素的比例
【答案】C
【方法点拨】
1.愈伤组织形成过程中,细胞还没有开始再分化,没有叶绿素和叶绿体的形成,不可能进行光合作用,因此愈伤组织形成初期不需要充足的光照。
2.培养的不同阶段,对主要营养物质和激素的需求不同,所以培养过程中要及时调整各种营养物质、激素的比例。
【变式训练】
下列有关植物组织培养技术的叙述,正确的是( )
A.经脱分化和再分化过程形成的幼芽细胞不具有细胞全能性
B.在愈伤组织培养过程中加入聚乙二醇,可获得染色体加倍的细胞
C.利用纤维素酶和果胶酶去除外植体的细胞壁有利于脱分化的发生
D.培养基中生长素和细胞分裂素的比例将影响愈伤组织分化的方向
答案D
三、实验操作过程
制备MS固体培养基:配制好的培养基进行高压蒸汽灭菌
↓
外植体消毒:→→→
↓
接种:始终在酒精灯火焰旁进行,对接种工具要用火焰灼烧灭菌,将菊花茎段插入培养基中时注意不要倒插
↓
培养与移栽:在18~22 ℃的无菌箱中培养,得到试管苗后进行移栽
A.消毒的原则是既杀死材料表面的微生物,又减少消毒剂对细胞的伤害
B.在愈伤组织培养中加入细胞融合的诱导剂,可获得染色体加倍的细胞
C.出芽是细胞再分化的结果,受基因选择性表达的调控
D.生根时,培养基通常应含α-萘乙酸等生长素类调节剂
【答案】B
【方法点拨】1.消毒剂的使用既要杀死材料表面的微生物,又要防止伤害组织细胞,影响组织培养。
2.带有细胞壁的愈伤组织细胞不能诱导融合形成染色体加倍的细胞。
【变式训练】
下列选项中,符合菊花组织培养的基本步骤的是A.制备MS培养基→外植体消毒→接种→培养→移栽→栽培B.制备MS培养基→外植体消毒→接种→培养→栽培→移栽C.制备MS培养基→外植体消毒→接
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