诺氟沙星单克隆抗体的制备与其特性鉴定.pdf

第32 卷 第9 期 中 国 预 防 兽 医 学 报 Vol. 32 ，No.9 2010 年 9 月 Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine Sep. 2010 doi: 10.3969/j.issn.1008-0589.2010.09.14 诺氟沙星单克隆抗体的制备及其特性鉴定 刘庆堂，职爱民，李青梅，柴书军，赵 东，张 磊，邓瑞广，张改平* (河南省农业科学院农业部动物免疫学重点开放实验室，河南郑州450002) 摘 要：为制备诺氟沙星单克隆抗体(MAb) ，用碳二亚胺法将诺氟沙星(Norfloxacin ，NFLX) 分别偶联于载体 蛋白牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA) ，合成免疫原BSA-NFLX 和包被原OVA-NFLX ，并用紫外(UV)扫描、 SDS电泳和免疫小鼠进行鉴定；用BSA-NFLX 免疫BALB/C 小鼠，间接ELISA 和阻断ELISA 选择细胞融 合备用鼠；应用杂交瘤技术建立分泌NFLX MAb 的细胞株，用体内诱生腹水法制备NFLX MAb ；对NFLX MAb 的效价、敏感性和特异性等特性进行测定。结果表明：NFLX 人工抗原制备成功，融合筛选后获得3C6 、3G11 两 5 株特异敏感的杂交瘤细胞，两株细胞培养上清液效价为 1∶512 ，腹水效价为1∶6.4×10 ，3C6 株对NFLX 的IC50 为 2.52 μg/L ，与二氟沙星、沙拉沙星有小于0.03 % 的交叉反应性，与其他抑制物无交叉反应性。本实验获得了高效 价、敏感、特异的抗NFLX MAb ，为NFLX 残留快速检测方法的建立奠定了基础。 关键词：诺氟沙星；单克隆抗体；免疫学特性 中图分类号：S851.4 文献标识码：A 文章编号：1008-0589(2010)09-0716-05 Development of monoclonal antibody against Norfloxacin LIU Qing-tang, ZHI Ai-min, LI Qing-mei, CHAI Shu-jun, ZHAO Dong, ZHANG Lei, DENG Rui-guang, ZHANG Gai-ping* (Key Laboratory for Animal Immunology of the Ministry of Agricultural, Henan Academy of Agricultural Sciences, Zhengzhou 450002, China) Abstract: Monoclonal antibody (MAb) directed against Norfloxacin was developed by fusion of myeloma cells with spleen cells obtained from mice immunized with BSA coupled norfloxacin antigen (BSA-NFLX). Two hybridoma cell lines, 3C6 and 3G11 that secret MAb specific for NFLX were established. The titer of the MAb determined by indirect ELISA were 1 ∶512 in 5 supernatant and 1 ∶6.4 × 10 in ascites,