转基因IgA肾病小鼠模型的建立和鉴定.pdfVIP

· 43 · 著 基础研究 转基 因 IgA 肾病小 鼠模型的建立与鉴定 谷 裕 。 刘 爽 。 朱 逸 ， 林芙君 ， 蒋更如 上海交通大学 医学 院附属新华 医院。肾脏科 ，上海 200092 [摘要] 目的 利用转基因方法构建一种新 的 自发性 IgA肾病小 鼠模型，模拟人体 IgA1分子铰链区结构的改 变在 IgA肾病发病过程中的作用。方法 利用转基 因方法将野生型(转基因A组)及糖基化位点突变 (转基因 B组)的人 IgA1铰链 区序列转入 C57BL／6J小 鼠体 内，置换小 鼠原有 的铰链 区序列。依据遗传学规则进行繁 殖 ，所有小 鼠均经过 PCR检测筛选 出基 因型阳性 。阳性亲代 鼠于24周龄 ，阳性 F1代小 鼠于 8周龄采集尿样 进行性状观察 、尿沉渣镜检和尿蛋 白／肌酐检测 ，取 肾脏组织进行 IgA免疫荧光染色和 H—E染色 以评估 IgA 沉积情况和肾脏组织学变化 ；心脏采血分离血清 ，检测 IgA、IgG水平。结果 转基 因A组和 B组分别得到阳性 亲代 鼠3只和 8只，分别获得 阳性 F1代小 鼠 17只和52只。2个转基 因组 的阳性亲代 鼠和 F1代小 鼠。肾脏 IgA免疫荧光染色显示 ，IgA在 肾小球系膜区沉积 ；H—E染色显示肾小球系膜细胞增生 ，系膜基质增多 ，间质有 炎症细胞浸润 ；新鲜尿沉渣镜检均未见红细胞。尿蛋 白／肌酐 、血清 IgA和 IgG水平均显著高于同周龄野生型 小 鼠。结论 采用转入人 IgA1铰链 区的方法可以构建出 IgA肾病小 鼠模型 ，IgA1铰链区结构 的改变在 IgA 肾 病发生中具有重要的作用 。 [关键词]IgA肾病 ；转基 因；小 鼠；铰链 区；糖基化 [DOI]10．3969／j．issn．1674_8115．2016．01．009 [中图分类号]R692．6 [文献标志码]A Establishmentand identificationofamicem odeloftransgenicIgA nephropathy GUYu，LIUShuang，ZHUYi，LINFu—jun，JIANGGeng—ru DepartmentofNephrology，XinhuaHospital，ShanghaiJiaoTongUniversitySchoolofMedicine，Shanghai200092，China 【Abstract]Objective TomimictheeffectsofstructuralchangesofhtehingeareaofhumanIgA1moleculeson thepathogenesisofIgA nephropathyviaanovelmouscmodelofspontaneousIgA nephropathyestablished by thetransgenicmethod． Methods Sequencesofthehingeareaofwlidtype(transgenicgroupA)andO—glycan sites—mutated(transgenicgroupB)humanIgA1wereinsertedintothefermiZedeggsofC57BL／6Jmicebythe transgenicmethod tO replace the originalsequences．M ice propagated based on geneticrulesand genotype— positivem icewereidentifiedbyPCR．The