DH10B 电击感受态细胞使用说明.pdfVIP

DH10B 电击感受态细胞 DH10B Electroporation Competent Cell 编号 名称 规格 北京华越洋 GX0233-100 DH10B 电击感受态细胞 10 ×100ul DH10B 电击感受态细胞基因型 F- mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ 80lacZ∆M15 ∆lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆ (ara, leu)7697 gal E15 gal K λ - rpsL nupG DH10B 电击感受态细胞说明 DH10B 菌株来源于MC1061 菌株，mcrA、mcrBC 及mrr 突变使DH10B 菌株适合于克隆 富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA (无论真核生物还是原核生物的基因组DNA 都能被高效 的转入DH10B 中)。recA1 和endA1 的突变有利于插入DNA 的稳定和高纯度质粒DNA 的 提取。φ 80dlacZ∆M15 标记的存在使DH10B 可用于蓝白斑筛选，rpsL 赋予其链霉素抗性。 High5TM 系列 DH10B 感受态细胞适用于大质粒的构建或者各种文库构建。High5TM 系列 DH10B 感受态细胞经特殊工艺制作，经 pUC19 质粒检测，转化效率1010cfu/μg。 注意：DH10B 电击感受态细胞只能用于电击转化而不能用于热激转化。 DH10B 电击感受态细胞操作方法 1. 0.1cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5 分钟，待其沥干水分，正 置5 分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm 以方便盖上杯盖，冰中静置5 分钟充分降温。 2. 取-80℃保存的High5TM 系列DH10B 感受态细胞放入冰浴中融化，加入 1 μl 目的DNA (质粒或连接产物)并用手拨打EP 管底轻轻混匀立即插入冰中。 A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19； B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀DNA 后适量TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬，保证DNA 浓度不超过 100 ng/μl。 3. 用200 μl 枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。 4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=2.4 kV (此为BioRad 电转仪推荐 参数，使用者也可按所用电转仪推荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快 速插入冰中。 5. 向电击杯中加入700 μl 不含抗生素的无菌培养基 S.O.C.，混匀后转移到空EP 管中， 37℃，200 rpm 复苏60 分钟。 4. 5000rpm 离心一分钟收菌，重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的2YT 或LB 培 养基上。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培 养至少 13h。 DH10B 电击感受态细胞注意事项 1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的 1/10。 2. 当质粒不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。 3. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大 一倍，转化效率下降一个数量级。 4. 对于连接产物转化，最好转化前用乙醇沉淀DNA 后适量TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产物，保证DNA 浓度不超过 100 ng/μ l。过高浓度连接产物或 过大体积连接产物会降低转化效率，增加打火的风险。 5. 混入质粒时应轻柔操作。 6. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。 DH10B 电击感受态细胞保存条件： -80℃ 华越洋 DH10B 电击感受态细胞相关： Rosetta-gami B(DE3)pLacI 感受态细胞 DMT 感受态细胞 Rosetta-gami 2(DE3)pLacI 感受态细胞 TKB1 感受态细胞 Rosetta-gami 感受态细胞 Origami 感受态细胞 Rosetta