培养基和试剂的质量要求.pptx

培养基和试剂的质量要求 GB 4789.28——2013 食品室：赵文 目 录 一 贮存 二 培养基的制备 三 灭菌 四 培养基的使用 五 培养基质量要求 贮存 实验室自制的培养基 在保证其成分不会改变条件下保存，即避光、干燥保存，必要时在5 ℃±3 ℃冰箱中保存: 通常建议平板不超过2周～4周 瓶装及试管装培养基不超过3个月～6个月 除非某些标准或实验结果表明保质期比上述的更长。 建议需在培养基中添加的不稳定的添加剂应即配即用，除非某些标准或实验结果表明保质期更长； 含有活性化学物质或不稳定性成分的固体培养基也应即配即用，不可二次融化。 二 培养基的配置 一般要求 实验室使用各种基础成分制备培养基时， 应按照配方准确配制，并记录相关信息，如：培养基名称和类型及试剂级别、每个成分物质含量、制造商、批号、pH、培养基体积（分装体积）、无菌措施（包括实施的方式、温度及时间）、配置日期、人员等，以便溯源。 二 培养基的配置 实验用水的电导率在25℃时不应超过25μS/cm(相当于电阻率≥0.4 ΜΩcm)，除非另有规定要求。 水的微生物污染不应超过103CFU/mL。应按GB 4789.2，采用平板计数琼脂培养基，在36 ℃±1 ℃培养48h±2 h进行定期检查微生物污染。 小心称量所需要的脱水合成培养基（必要时佩戴口罩或在通风柜中操作，以防吸收含有有毒物质的培养基粉末），先加入适量的水充分混合（注意避免培养基结块），然后加水至所需的量后适当加热，并重复或连续搅拌使其快速分散，必要时应完全溶解。含琼脂的培养基在加热前浸泡几分钟。 二 培养基的制备 湿热灭菌 湿热灭菌在高压锅中进行，一般采用121℃±3℃灭菌15min，灭菌效果的控制是关键问题，加热后采用适当的方式冷却，以防加热过度。 过滤除菌可在真空或加压条件下进行。使用孔径为0.2μm的无菌设备和滤膜。消毒过滤设备的各个部分或使用预先消毒的设备。 应对经湿热灭菌或过滤除菌的培养基进行检查，尤其要对pH、色泽、灭菌效果或均匀度指标进行检查。有毒成分添加必要时应在通风柜中进行。 过滤除菌 检查 三 灭菌 五 培养基的质量要求 生长特性 选择下列方法对每批成品培养基或试剂进行评价：  ——定量方法；  ——半定量方法；  ——定性方法。 采用定量方法时，应使用参考培养基进行对照；采用半定量和定性方法时，使用参考培养基或能得到“阳性”结果的培养基进行对照有助于结果的解释。参考培养基应选择近期批次中质量良好的培养基或是来自其他供应商的具有长期稳定性的批次培养基或即用型培养基。 五 培养基的质量要求 生长率 按规定用适当方法将适量测试菌株的工作培养物接种至固体、半固体和液体培养基中。 每种培养基上菌株的生长率应达到所规定的最低限值。 选择性 为定量评估培养基的选择性，应按照规定以适当方法将适量测试菌株的工作培养物接种至选择性培养基和参考培养基中，培养基的选择性应达到规定值。 例如：XLD生长率：定量测试(TSA为参比培养基)PR≥0.5选择性：半定量大肠 G 5金葡 G≤1 培养基不能凝固 制备过程中过度加热 低pH造成培养基酸解 称量不正确 琼脂未完全溶解 培养基成分未充分混匀 pH不正确 制备过程中过度加热 水质不佳 外部化学物质污染 测定pH时温度不正确 pH计未正确校准 脱水培养基质量差 颜色异常 制备过程中过度加热 水质不佳 pH不正确 外来污染 脱水培养基质量差 常见问题 产生沉淀 制备过程中过度加热 水质不佳 脱水培养基质量差 pH未正确控制 原料中的杂质 培养基出现抑制/低的生长率 制备过程中过度加热 脱水培养基质量差 水质不佳 使用成分不正确，如成分称量不准，添加剂浓度不正确 制备容器或水中的有毒残留物 选择性差 制备过程中过度加热 脱水培养基质量差 配方使用不对 添加成分的加入不正确，例如加入添加成 分时培养基过热或添加浓度错误 添加剂污染 污染 不适当的灭菌 无菌操作技术存在问题 添加剂污染 。 观 赏 谢 谢