蛋白质异源表达及其稳定性的定向进化报告.ppt

蛋白质异源表达及其稳定性的定向进化  0 1 内 容 蛋白质的定向进化 1 定向进化的方法 2 定向进化的筛选 3 蛋白质定向进化的应用前景 4 2 蛋白质的定向进化方法 2 体外随机引发重组 error-prone PCR（易错PCR） DNA shuffling (DNA改组) 3 2 error-prone PCR（易错PCR） 概念：利用PCR过程中出现的碱基错配对特定基因进行随机诱变的技术称为易错PCR（error-prone PCR）。 原理:通过降低传统PCR中一种或者两种dATP dGTP dCTP dTTP 的浓度并且加入一定量的MnCl2，同时采用低保真度的TaqDNA聚合酶。使基因在扩增时能随机的创造突变。遗传变化只发生在单一分子内部,故属于无性进化(asexual evolution) 操作手段： （１）降低氯化镁的浓度； （２）是添加氯化锰 （３）是降低其中某一种单核苷酸的浓度或者 用核 苷酸三磷酸盐类似物替代其中一种单核苷酸 关键：选择适当的突变频率 优点：快速、简便、操作方便 缺点：它比较费力耗时,一般适用于较小的基因片段( 800bp） 3 2 error-prone PCR（易错PCR） error-pronePCR 3 2 DNA shuffling (DNA改组)