（新课标）高中生物 专题5 DNA和蛋白质技术 课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段课件 新人教版选修1.pptVIP

课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段 【课题背景】 在刑事侦破案件中常需要对样品DNA进行分析，PCR技术能快速扩增DNA片段，在几个小时内复制出上百万份的DNA拷贝，有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的问题。现在PCR技术已广泛应用于遗传病的诊断、刑侦破案、古生物学、基因克隆和基因测序。 【课题目标】 1.理解PCR的原理和反应过程 2.尝试PCR技术的基本操作 3.讨论PCR技术的应用 PCR仪 以“DNA复制”为背景材料，设计问题，导入新课，首先回顾DNA的结构和复制的有关知识，然后了解PCR技术的原理和应用，接着讲解PCR技术的反应过程及具体实验操作步骤，后以视频观看来再次学习实验的知识点。最后通过课堂检测完善所学内容。 通过对PCR反应过程的教学，应以读图识图为主。教材中反应过程图解详细的描绘了参与PCR的各种组成成分；每一轮反应的三个基本步骤—变性、复性、延伸；每一步骤的作用。在教学中分析图形的同时，结合教科书中的文字说明来加深理解。 参与的组分 在DNA复制中的作用 解旋酶 DNA母链 4种脱氧核苷酸 DNA聚合酶 引物 1.胞内DNA复制的基本体系 一、基础知识 打开DNA双链 提供DNA复制的模板 合成子链的原料 催化合成DNA子链 使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸 (一）PCR原理 2.DNA双链方向与复制关系 （2）DNA聚合酶只能从3 ′端延伸DNA链，故DNA复制需要引物。 （1）DNA的羟基“－OH”末端称为3’端，而磷酸基团的末端称为5’端。 DNA合成总是从子链的5 ′端向3 ′端伸 3 ′端 5 ′端 3.PCR原理 （1）DNA的热变性原理 通过控制温度来控制双链的解聚与结合 ①变性： 80－100°C的温度范围内， DNA双螺旋结构解体，双链分开 加热变性 ②复性： 温度缓慢降低后，两条彼此分离的DNA链重新结合成双链 缓慢冷却复性 （2）耐高温的Taq DNA聚合酶 （3）缓冲液为PCR反应提供的物质 DNA模板，分别与两条模板链相结合的两种引物，四种脱氧核苷酸，耐热的DNA聚合酶，同时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行 【方法点拨】细胞内复制和PCR不同点 ① PCR过程需要的引物不是RNA，而是人工合成的DNA单链，其长度通常为20－30个脱氧核苷酸 ② PCR过程中DNA的解旋不依靠解旋酶，而是通过对反应温度的控制来实现的 （二）PCR的反应过程 PCR一般要经历三十多次循环，每次循环分为变性、复性和延伸三步 (1)变性 温度上升到90 ℃以上时，双链DNA解旋为单链。 (2)复性 温度下降到50 ℃左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。 温度上升到72 ℃左右，溶液中的四种脱氧核苷酸(A、T、C、G)在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。 (3)延伸 【方法点拨】 (1)72 ℃左右时，TaqDNA聚合酶有最大活性，可使DNA新链由5′端向3′端延伸。 (2)DNA聚合酶只能特异性地复制处于两个引物之间的DNA序列，使该段固定长度的序列呈“指数式”扩增。 标准的PCR过程一般分为变性、复性、延伸三大步，这三大步需要的温度依次是(　　) A．92 ℃、50 ℃、72 ℃　　B．72 ℃、50 ℃、92 ℃ C．50 ℃、92 ℃、72 ℃ D．80 ℃、50 ℃、72 ℃ 栏目链接 【典型例题】 A 【方法点拨】 1.变性： 温度上升到90 ℃(90～96 ℃)以上时，双链DNA解旋为单链 2.复性： 温度下降到50 ℃(40～60 ℃)左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合 3.延伸： 溶液中的四种脱氧核苷酸(A、T、C、G)在Taq DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链 二、实验操作 1.PCR仪 （一）设备及用具 一台能够自动调控温度的仪器 2.微量离心管 一种薄壁塑料管，总容积为0.5ml 3.微量移液器 用于定量转移PCR配方中的液体，其上的一次性吸液枪头用一次更换一次 1.准备 2.移液 （二）实验操作步骤 按照PCR反应体系的配方将所需用的试剂摆放在实验桌上。 用微量移液器按照PCR反应体系配方往微量离心管里面加入各种试剂。 3.混合 ①过程：盖严微量离心管口的盖子，用手指轻轻弹击管壁。 ②注意: A.离心管口的盖子一定盖严，防止实验中脱落或液体外溢。 B.手指轻轻弹击微量离心管的管壁，目的是使反应液混合均匀。 4.离心 ①过程：将微量离心管放在离心机上,离心约10s。 ②目的：使反应液体集中在离心管底部，提高反应效果。 循环数 变性 复性 延伸 第一次