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第十二章 转录 1957年 Crick提出了中心法测(central dogma) DNA → RNA→ 蛋白质 1970 Crick又作了部分修改： DNA RNA 蛋白质 第一节 信使的发现 1955年Brachet用洋葱根尖和变形虫进行实验： 若加入RNA酶，则蛋白质合成就停止； 若再加入从酵母的RNA，又可合成蛋白质。 这表明什么？ 同年Goldstein和Plaut用同位素标记变形虫RNA前体， 发现标记的RNA在核内。 标记追踪实验：经过一段时间发现被标记的RNA在细胞质中， 此表明什么？ 1956年E. Volkin和 L.Astrachan： 用同位素脉冲一追踪标记 表明T2噬菌体新合成的RNA的碱基比和的DNA碱基比相似，而和细菌的碱基比不同，。由于T2感染细菌时注入的是DNA，而在细胞里合成的是RNA， 此表明什么？ 最令人信服的证据是Hall.B.D和Spiegeman,S的DNA-RNA的杂交实验。， 将T2噬菌体感染E.coli后产生的RNA分离出来， 分别与T2和E.coli的DNA进行分子杂交，结果这种RNA只能和T2的DNA形“ 杂种”链，而不能和E.coli的DNA进行杂交。 Jacob和Monod预言: （1）这种“ 信使”应是一个多核苷酸； （2）其分子平均不小于5?105bp,足以携 带一个基因的遗传信息； （3）它们至少是暂时连在核糖体上； （4）其碱基组成反映了DNA的序列； （5）它们能高速更新。 Jacob和Monod将它定名为: 信使RNA（Messenger RNA）或mRNA。 第二节 RNA的酶促合成 一. RNA合成的基本特点 1960年Weiss,S,B等发现RNA聚合酶（RNA Pol）。 其特点是： （1）以核糖核苷三磷酸（rNTR）为底物； （2）以DNA为模板； （3）按5′-3′方向合成； （4）无需引物的存在能单独起始链的合成； （5）第一个引入的rNTP是以三磷酸形式存在； （6）在体内DNA双链中仅一条链作为模板； （7）RNA的序列和模板是互补的。 确定有义链 1963 J.Marmur和Doty Spiegelnan区分有义链。采用枯草杆菌的SP8噬菌体为材料， SP8 DNA 双链有“ 轻”、“ 重”差异明显。 现在将作为转录模板的DNA单链称为模板链或反义链（antisen strand）， 非模板链称为有义链（sense strand）或编码链。 在体外DNA的两条链都可作为RNA合成的模板。 Gene 怎样用实验证实mRNA的合成总是延着5-3′方向进行的？ E.coli在 0?C时需13秒钟才能加上一个核苷酸，但在37?C每秒就可加上40个核苷酸; 利用这个差别以14C来标记U,在0?C培养E.coli，。 提取这种正在伸长的mRNA分子 发现14C标记首先出现在伸长的3′端，因此可以证明合成是延着5′-3′方向进行的。 RNA合成和DNA复制的区别 （1）转录时只有一条DNA链为模板，而复制 时两条链都可作为模板； （2）DNA-RNA杂合双链不稳定，RNA合成后释放，而DNA复制叉形成后一直打开，新链和母成子链； （3）RNA合成不需引物，而DNA复制需引物； （4) 转录的底物是rNTP，复制的底物是dNTP； （5）聚合酶系不同。 第三节 细菌基因的转录 一．细菌的RNA聚合酶 RNA pol和DNA pol也有2点不同： （1）RNA pol没有任何校对功能； （2）能起始新的RNA链。 RNA pol 执行多功能 (1) 识别DNA双链上的启动子； (2) 使DNA变性在启动子处解旋成单链； (3) 通过阅读启动子序列，RNA pol确定它 自己的转录方向和模板链。 (4) 最后当它达到终止子时，通过识别停止转录。 二. 原核生物转录的起始延伸 (一) 启动子（promoter）的结构和转录起始 (1)结构典型,都含识别（R),结合（B)和起始 （I）位点; (2)序列保守; (3)位置和距离都比较恒定； (4)直接和多聚酶相结合； (5)常和操纵子相邻； (6)位于基因的5′端； (7)决定转录的启动和方向。 (8)特特殊的操纵子的R,B序列不同。 E.coli中不同的?因子 可识别不同的启动子 典型启动子的结构 -35