96 电泳分离法.ppt

第九章 分析测定中常用的分离方法 第六节 电泳分离法 电泳分离法 9.6.1 电泳分离法的基本原理 两种离子在 t 时间内迁移的距离差 影响带电粒子分离程度的因素 影响带电粒子分离程度的因素 9.6.2 电泳分离法的分类 （2）按电泳的支持物形状区分 9.6.3 电泳分离法的应用 课程结束 9.6.1 电泳分离法的原理 9.6.2 电泳分离法的分类 9.6.3 电泳分离法的应用 1937年，Tiselius(瑞典科学家)将蛋白质混合液放在两段缓冲溶液之间，两端施以电压进行自由溶液电泳，第一次将人血清提取的蛋白质混合液分离出白蛋白和α、β、γ球蛋白。获1948年诺贝尔化学奖。 电泳(Electrophoresis)是带电离子在电场作用下发生迁移的过程。利用电泳现象对某些化学或生物化学物质进行分离分析的技术叫电泳技术或电泳法。 电泳是指带电离子在电场中的定向移动，不同离子具有不同的迁移速率。迁移速率与哪些因素有关？ 带电球形粒子在单位电场（1V/cm)下的泳动速率 式中：ν为粒子的泳动速率；E为电场强度；Q为粒子的净电；r为粒子半径；μ为介质黏度；V为外加电压；L为两电极间距离；t 为电泳时间；s为迁移的距离。 Δμ、t 、V / L三者的值越大，分离的越完全。 影响分离的因素？ （1）带电离子的迁移率 在一定电场和介质条件下带电粒子的迁移率与所带的电荷呈正比，与粒子半径呈反比。 阳离子与阴离子的迁移方向相反，最易分离； 二价离子的迁移率为一价离子的2倍。 （2）电解质溶液的组成 电解质组成影响溶液黏度、离子有效半径、电荷（如配位）等。 （3）外加电位梯度 在L一定时，两电极间的电压越高，分离所需时间越短，分离也越完全。 但是，在增大电压的同时产生更多的焦耳热，使介质温度升高，扩散加剧等影响,带来不利影响。电压要适当！ （4）电泳时间 电泳时间越长，离子迁移距离越大，对分离有利。 但是，同样产生扩散加剧等影响。电泳时间要适当！ 通常按电泳中的某一特征命名，如 （1）按有无固体支持物区分 自由溶液电泳：无支持物的溶液自由进行的电泳。包括：柱电泳、自由流动幕电泳等。 有支持物电泳：在支持体上继续的电泳（应用广）,包括：聚丙烯酰胺电泳、纸电泳、琼脂糖凝胶电泳、醋酸纤维素膜电泳。 U形管电泳、柱状电泳、平板电泳、垂直电泳等。 纸电泳：多用于分离多种金属离子； 聚丙烯酰胺电泳：多用于分离生物大分子。 结束 让知识陪伴您一生！ * *