1基因工程-张韶杰.ppt

* * 第1讲 基因工程 一、基因工程的基本操作程序 ? ? ? . （一）获取目的基因 1. .（基因较小，序列已知） 2. . 3. . . .（如：cDNA文库） 化学方法人工合成 PCR技术扩增 从基因文库中获取 基因组文库 部分基因文库 PS1 :cDNA文库 1）构建方法： 2）与基因组文库区别：无 . 启动子、内含子等非编码区 获取目的基因 构建表达载体 导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定 1.对基因组文库的描述，不正确的是（??? ） A．含有某种生物的全部基因 B．基因中含有启动子和内含子 C．文库的基因是通过受体菌承载的 D．文库中的全部基因可以在物种间交流 《3+2》P245 基础题 D cDNA文库无 cDNA文库可 PS2 :PCR技术 1）中文名及发明者： ， . 2）基本原理： . 4）反应过程：高温 ?低温 ?适温 . 3）反应条件： 、 、 、 . 多聚酶链式反应 美.穆里斯 模拟胞内DNA复制 模板 引物 原料 热稳定DNA聚合酶 变性解旋 复性结合 延伸复制 （一）获取目的基因 一、基因工程的基本操作程序 （二）构建表达载体（核心） 表达载体 = + + + . 启动子 目的基因 终止子 标记基因 ( ) ( ) RNA聚合酶识别和结合部位 筛选含目的基因的受体细胞 PS1 :切割质粒和目的基因时，要用 ， 连接时用 . PS2 :基因工程的基本工具 1）限制性核酸内切酶（ ） ①主要来源： ②作用特点： ③作用结果： 同种限制酶 DNA连接酶 限制酶 原核生物 识别特定DNA序列，并在特定部位切开磷酸二酯键 黏性末端和平末端 PS2 :基因工程的基本工具 3）载体 ①种类： 、 、 . ②特点（载体需满足条件）： 能 、 有 、 有 、 对 . 质粒 噬菌体 动植物病毒 小型双链环状DNA 自我复制 一个或多个限制酶切割位点 标记基因 受体细胞无害 2）DNA连接酶 E.coli T4 . . 否 皮肤细胞不含胰岛素mRNA 逆转录 热稳定DNA聚合 同种限制酶 相同的黏性末端/平末端 DNA连接酶 （重组质粒） Ca2+ 《3+2》P245 基础题 胰蛋白 启动子 终止子 引物 耐热DNA聚合酶 增大细胞贴壁生长的附着面积 《3+2》P246 高考题 一、基因工程的基本操作程序 （三）导入受体细胞（转化） 微生物 动物 植物 常用导入方法 常用受体细胞 生物种类 体细胞 受精卵 大肠杆菌 农杆菌转化法、 基因枪法、花粉管通道法