《生药学》理化鉴定.ppt

DNA 分子鉴定 20世纪90年代中后期开始 解决形态鉴定的某些局限 同属多来源药材的鉴别 道地药材的鉴别等 特点：稳定性、多样性、化学稳定性 方法：RFLP、PCR、RAPD等 应用：植物分类、中药材鉴别、道地生药鉴定 PCR (Polymerase chain reaction) PCR fragments Interested DNA sequences Primer Primer Identification of TCM by DNA Molecular Marker Extracts Genomic DNA DNA sequencing 寻找特征性基因 PCR-RFLP DNA Chip Diagnostic PCR DNA分子遗传标记在生药鉴定中的应用 1．在植物进化、分类、鉴定中的应用 应用分子遗传标记技术来研究种间、属间的DNA变异情况，从而揭示物种的亲缘关系，为物种鉴定及系统学研究提供依据。 采用RAPD分子标记方法比较4种甘草属植物光果甘草、乌拉尔甘草、刺甘草和刺果甘草的遗传关系。 通过DNA扩增的RAPD指纹图谱分析，结果发现富含甘草甜素的光果甘草和乌拉尔甘草之间遗传关系非常相近。 这两者与不含甘草甜素或含量极低的刺甘草和刺果甘草的遗传关系则较远，与植物分类学研究相吻合。 2．在中药材鉴别中的应用 通常PCR扩增的模板DNA都来自新鲜的动植物组织材料，因DNA分子遗传标记方法用于生药鉴别中，首先要解决的问题是能否从干的或陈旧的生药样品中提得生药本身的DNA，并能用于PCR扩增，这方面已有成功的报道。 用RAPD方法对人参、三七及4种人参伪品的DNA进行PCR扩增，所得DNA指纹图谱可用于区别人参属的3种生药及伪品。 3．在道地生药鉴定中的应用 一个物种的种内多样性是道地药材品质形成的生物学基础。 道地生药与非道地生药的本质区别是作用物质基础有效成分的差异，其形成主要受遗传因子和环境因子的影响。 应用DNA遗传标记技术，比较道地生药与非道地生药的基因差异，将有助于阐明道地生药的成因。 理化鉴定  理化鉴定(physical and chemicalidentification) 利用某些物理的、化学的或仪器分析方法，对生药中所含有效成分或主要成分或特征性成分进行定性和定量分析，以鉴定其真伪和品质优良度的一种方法。 理化鉴定 中药理化鉴定发展很快，新的分析手段和方法不断出现。 可确定中药的真伪优劣； 开发利用新资源； 指导中药材的栽培加工，扩大药用部分； 制订中药质量标准。 发展方向：从宏观和微观的形态学鉴定向有效成分和药效鉴定方向发展。 常用的理化鉴定方法 化学定性反应 微量升华 荧光分析 色谱法 纸色谱与薄层色谱(PCTLC) 气相色谱（GC) 高效液相色谱(HPLC) 电泳法 光谱法 定义 方法 直接将生药切片或粉末置载 玻片上，滴加试液，加盖玻 片在显微镜下观察产生的结 晶、沉淀或颜色。 生药的提取物置载玻片上， 滴加试液，加盖玻片在显微 镜下观察反应。 显微化学定位 一、 化学定性反应 1.显微化学反应 2.沉淀反应： 利用生药某些化学成分能与某些试剂产生特殊的沉淀反应来鉴别。 3.泡沫反应和溶血指数的测定 二、微量升华 利用中药中所含的某些化学成分，在一定温度下能升华的性质，获得升华物，在显微镜下观察其结晶形状、颜色及化学反应作为鉴别特征。 一、微量升华的原理及方法 二、在鉴定中的应用 三、荧光分析 利用生药中所含的某些化学成分，在紫外光或自然光下能产生一定颜色的荧光性质进行鉴别。 例如 黄连饮片显黄色荧光； 浙贝母粉末显亮淡绿色荧光； 大黄粉末显深棕色荧光。 荧光效率主要与物质的结构有关，具有π-π共轭结构的物质才能产生较强的荧光，共轭结构加长，荧光增强。 含有黄酮、恩醌、香豆素、木脂素成分的生药，一般具有较强的荧光反应。 荧光分析法在生药鉴定中的应用 定性分析 紫外分析仪法 1、观察生药整体 2、观察生药的新鲜断面或饮片 3、观察生药粉末 4、直接观察生药的某种溶剂浸 出液 5、将生药提取液滴于滤纸上， 挥干溶剂观察 6、生药提取液与化学试剂作用 后产生荧光 7、多重观察 日光法 荧光显微镜法 荧光光谱法 定量分析：荧光分光光度法、薄层荧光扫描法 四、色谱法 常用以下三种色谱法： 薄层色谱法(TLC) 气相色谱法(GC) 高效液相色谱法(HPLC) 薄层色谱 操作：选择吸附剂 制备薄层板 点样 定性参数的选测定 显色 展开 （比移值Rf、相对比移值Rst）