金银花干叶中黄酮类物质提取工艺.doc

金银花干叶中黄酮类物质提取工艺研究 【摘要】本实验以乙醇为溶剂，采用超声波法从金银花干叶中提取黄酮，并通过单因素考察和四因素三水平的正交试验确定超声波法提取金银花干叶中黄酮类物质的最佳工艺条件。同时，运用最佳工艺条件提取金银花植物各部分的黄酮并测定其含量。结果表明，最佳提取工艺是以70%乙醇、物料比1:10，超声波温度60℃提取20min；黄酮含量测定结果显示，金银花干花的黄酮含量比干枝、干叶和鲜枝、鲜叶高约4-6倍。 【关键词】金银花干叶；黄酮；提取工艺；正交试验；含量测定 目 录 1 前言 1 2 仪器与材料 3 3 实验方法 4 3.1样品预处理 4 3.2试剂配制 4 3.2.1配制芦丁标准应用液 4 3.2.2建立工作曲线 4 3.3总黄酮的测定 5 3.3.1铝配合物分光光度法 5 3.3.2样品总黄酮含量测定 5 3.4单因素试验 5 3.4.1乙醇浓度对提取效果的影响 5 3.4.2超声波提取时间对提取效果的影响 5 3.4.3料液比对提取效果的影响 5 3.4.4超声波仪温度对提取效果的影响 6 3.5正交试验 6 4 结果与分析 7 4.1总黄酮的测定 7 4.1.1绘制标准曲线 7 4.2单因素试验结果 8 4.2.1乙醇浓度对提取效果的影响 8 4.2.2超声波提取时间对提取效果的影响 8 4.2.3料液比对提取效果的影响 9 4.2.4温度对提取效果的影响 10 4.3正交试验结果 10 4.4金银花各部分的黄酮提取与含量测定 12 4.4.1实验方法 12 4.4.2结果与分析 13 5 结论与展望 14 参考文献 15 金银花是我国传统的中药植物，具有清热解毒、凉风散热、抗病毒、保肝利胆等功能，是主治痈肿疔疮．喉痹，丹毒，热毒血痢，风热感冒，温病发热的常用药材。[]金银花叶中的黄酮类化合物有木犀草、 忍冬苷等。经研究表明, 不同时期的金银花修剪各部位均含有黄酮,节部和叶片含量最高花中次茎含量较低[]。金银花越冬老叶中黄酮含量约为药用金银花的2.78倍、忍冬藤的6.98倍[3]黄酮上述分布特征提示了金银花叶和节部可能是较好药用部位，但是金银花叶片一直被视为非药用部位而长期未得到充分利用。根据我国16各省市和自治区的158个市、县的202个金银花商品样品的研究，共鉴定出其原植物分属于忍冬属14个种1个亚种和2个变种，其中以忍冬分布最广、质量最高。金银花的产量以山东省最丰，品质则以河南省为上乘。河南、山东是金银花的传统和地道产地。[]根据上述文献资料，可见金银花枝叶的药源比金银花丰富，采集容易，价格相对便宜，应该充分利用。 黄酮类化合物(Flavonoid)，又称生物类黄酮，广泛存在于自然界中，约1/4的植物中含有黄酮，已知化学结构的黄酮类化合物近5000种，其数量居天然酚类物质之首，广泛存在于植物的各个部位，主要存在于芸香料、唇形科、豆科、伞形科、银杏科与菊科中。据研究，约20%的中草药中含有黄酮类化合物，来源非常广泛。[]黄酮具有抗癌防癌、延缓衰老、增强心血管功能、增强机体免疫功能、抑菌抗病毒和抗炎镇痛等药理活性，是多种中药材的有效成分。我国研究的124种防治气管炎药物中，就有69种含有黄酮类化合物，黄酮类化合物的作用比较温和,在治疗心血管系统和慢性气管炎等新药的寻找方面占一定地位。[6]在食品工业中，黄酮类物质还可以作为抗氧化剂、天然色素和甜味剂使用。 有关文献桑叶、银杏、葛根、竹类、水芹及大豆等植物黄酮提取工艺的研究成果较多，但是金银花枝叶提取黄酮的工艺研究成果较少本实验以求为金银花植物进一步开发利用提供理论依据。试剂瓶胶头滴管150ml具塞三角瓶25ml具塞比色管100ml容量瓶500ml抽滤瓶玻璃棒移液管（1ml、2ml、5ml）漏斗比色管架KQ-500E型超声波清洗器；V-1200型紫外可见分光光度计；真空抽滤泵等（试剂均为分析纯）。 实验方法 样品预处理 金银花干枝、干叶和干花样品用粉碎机粉碎，过60目筛干燥保存备用，鲜枝、鲜叶样品在使用前用粉碎机粉碎，不可长时间保存应现制现用。 试剂配制 本实验需要使用50g/L的亚硝酸钠溶液、100g/L的硝酸铝溶液和10g/L的氢氧化钠溶液。具体配制方法如下：称取5.0g亚硝酸钠，用水溶解后定容到100ml即可得到50g/L的亚硝酸钠溶液，保存于试剂瓶中备用；称取10.0g硝酸铝，用水溶解后定容到100ml即可得到100g/L的硝酸铝溶液，保存于试剂瓶中备用；称取10.0g 氢氧化钠，用水溶解后定容至1L即可得到10g/L的氢氧化钠溶液，保存于非磨口试剂瓶中备用。 配制芦丁标准应用液 称取0.2000g (精确至0.0002g）芦丁对照品（已知质量分数大