印记SNP+rs220028的法医学应用研究.pdfVIP

法医物证哮 印记SNP rs220028的法医学应用研究 赵贵森，黄代新，杨庆恩，余纯应，杨荣芝 (华中科技大学同济医学院法医学系，湖北武汉430030) 目的以印记SNP 【摘要】 rs220028为模型，探讨亲源特异性甲基化标记的法医学意义。方法用片段长度差 异等位基因特异性PCR(FragmentsLength Allele DiscrepantSpecific 和50个三联家系，进行群体遗传学和家系分析；用消化后FLDAS—PCIR(Post—digestion PCR)检测18例子代的甲基化等位基因，推断其亲代来源，并与家系分析结果进行比较。结果群体中检出两个等位 SNP的PEd和DP值分别提高100％和20％。结论SNP 位点的甲基化标记和SNP标记可以推断生父(母)基因。 rs220028 【关键词】 法医物证学；DNA甲基化；基因组印记；SNP 基因组印记是指某些基因座的父源和母源等位基 K法提取DNA，分光光度法定量。 因带有不同的标记，子代根据这种标记选择性表达来 1．2基因组DNA的限制酶消化 I20U， 1tzg，Not 自亲代一方的等位基因。这种亲源特异性标记的本质 总体积20pJ，内含基因组DNA 是DNA甲基化u’23。如SNRPN基因座，来自母亲的 等位基因被甲基化，不能表达，只有父源未甲基化等 反应。以50％甘油代替NotI作为对照。酶切后的 位基因的表达产物’4J。理论上，可以通过分析这种 DNA用酚一氯仿法抽提、无水乙醇沉淀，溶解定量 甲基化标记来推断子代的等位基因哪个来自父亲、哪 后备用。 1．3 PCR扩增及产物检测 rs220028(A／G)位于SNRPN基 个来自母亲。SNP 因外显子0c附近，与一个亲源特异性甲基化标记 (甲基化限制酶NotI位点：GCGGCCGC)相距16bp。rs220028和Not 法，在SNP I基因座点的侧翼设计一 可以用NotI消化来分析这个标记的甲基化状态，推 对通用引物和两条不同长度的等位基因特异性引物 断连锁的SNP等位基因的亲代来源，是一个理想的 1．5mlnol／L rs220028的FLDAS— 研究模型。本研究在建立SNP PCR分型方法，调查群体数据的基础上，用消化后 FLDAS—PCR联合分析SNP和甲基化标记，探讨用 基因组印记确定等位基因亲源的可行性及其法医学意 FLDAS—PCR以Not I消化后的基因组DNA为模板， 义。 内含引物CFP和CRP各0．2 I,mol／L，其他各成分及 1材料与方法 1．1样品 117份武汉汉族无关个体血样由武汉同济医院血 94℃30s，600C 库提供；50例父一母一子真三联血样，2份精斑， 男、女各2例的脑、肝、肾、心肌、肺、骨骼肌组织 和口腔拭子，均取自本系案例。用细胞裂解／蛋白酶