微生物的培养学案(缪运良).doc

发酵技术与微生物的培养、应用学案 一、传统发酵技术的应用 1、果酒制作原理：酵母菌是兼性厌氧型微生物。在缺氧、呈酸性发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物生长受抑制。 酵母菌在无氧条件下进行酒精发酵：C6H12O6→2C2H5OH＋2CO2＋少量能量 2、果醋制作原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸； 当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。 醋酸菌代谢类型：异养需氧型 3、果酒果醋制作流程：挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→果酒（→醋酸发酵→果醋） 4、腐乳制作原理：多种微生物参与了发酵，起主要作用的是毛霉。毛霉是真菌。代谢类型是异养需氧型。毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸。 5、腐乳制作流程：让豆腐上长出毛霉→加盐腌制→加卤汤装瓶→密封腌制 6、泡菜制作原理：制作泡菜所用微生物是乳酸菌 ，其代谢类型是异养厌氧型。在无氧条件下，将葡萄糖分解为乳酸。 7、泡菜制作流程： 8、测定亚硝酸盐含量的方法是比色法。 二、微生物的培养和应用 1. 微生物的培养和分离技术 （1）微生物生长需要一般都含有水、碳源、氮源、无机盐 （2）培养基的制作合格与否通过未接种的培养基表面是否有菌落生长来验证 （3）常用的无菌技术有： a、对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。 b、将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。 c、为避免周围环境中的微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 d、实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。 考点细化： ①消毒是指用较为温和的理化方法杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物，不包括芽孢、孢子。 ②灭菌的方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌，灼烧灭菌用于接种用的金属工具；干热灭菌用于能耐高温的，需要保持干燥的玻璃器皿等；高压蒸汽灭菌用于培养基等 （4）微生物纯培养是指防止外来杂菌入侵。纯化的方法：平板划线法和稀释涂布平板法 （5）配制固体培养基的步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板 （6）微生物接种的方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养。分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。 考点细化： ①平板冷凝后，要是有水滴滴到培养基上，会导致污染。为防止冷凝水滴到培养基上所以培养时平板一定要倒置。 ②接种操作每次划线之前都要灼烧接种环，是因为每次操作都要及时灭菌，以防污染杂菌。操作结束时，仍然需要灼烧接种环的原因是防止杂菌污染环境。 2. 特定微生物的数量的测定 （1）测定微生物数量的方法有显微镜直接计数、稀释涂布平板法统计菌落数目。 （2）显微镜直接计数：死菌和活菌一起统计；而稀释涂布平板法检测的是活菌的数量。 （3）比较显微镜直接计数与稀释涂布平板法计数 项目 显微镜直接计数法 稀释涂布平板法 原理 利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量 当样品的 时，培养基表面生长的 ，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的 ，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 主要用具 血细胞计数板 固体 培养基 计数依据 优点 计数方便，操作简单 计数的是 缺点 、活菌都计数在内 操作较复杂，有一定误差 （4）一般来说，统计的菌落数往往比活菌的实际数目 。这是因为 。因此，统计结果一般用 而不是活菌数来表示。 （5）统计菌落数目（如何推测出每克样品中的菌株数） ①分析教材中哪位同学的结果更接近真实值，是否改进如果需要如何改进？ ②推测出每克样品中的菌株数（并分析分别代表的含义） 显微镜直接计数法：每毫升原液含菌数=400x1000x每小格平均菌体数x稀释倍数 稀释涂布平板法： ③如何增加实验的说服力？ （6） 设置对照 ① 设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响，提高实验结果的 。② 分析A同学的结果出现的可能原因？如何设置对照排出影响因素？ 3. 培养基对微生物的选择作用 （1）、分解尿素的细菌的培养基配方（分析P22左侧培养基配方） ①该培养基中含有微生物生长所需的 等营养，从物理性质划分该培养基属于 ，从功能划分该培养基属于 ②在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮