2007年莙政学者结题通知-FDUROP-复旦大学.doc

转铁蛋白受体介导的聚合物泡囊递药系统 的构建研究 药学院04级 高会乐 药学院药剂学教研室 蒋新国 研究员 摘要：构建一种转铁蛋白受体介导的聚合物泡囊递药系统。以可生物降解性的共聚物聚乙二醇-聚己内酯（MPEG-PCL）与马来酰亚胺-聚乙二醇-聚己内酯（Maleimide-PEG-PCL）为材料，采用注入法制备聚合物泡囊（PS），并将其与转铁蛋白受体的单克隆抗体OX26共价连接。采用激光粒度测定仪、透射电镜对OX26-PS的大小形态进行鉴定；采用免疫透射电镜和X射线光电子能谱（XPS）对OX26-PS表面连接的OX26进行定性鉴定；采用ELISA法定量测定递药系统表面连接的OX26数目。结果显示，OX26-PS平均粒径在100nm左右，免疫透射电镜和 XPS证实OX26与PS共价连接的存在，ELISA法测得Maleimide-PEG-PCL与MPEG-PCL比例为1:10时PS表面连接的OX26平均数目为40.6个。 关键字：OX26，聚合物泡囊，脑靶向，血脑屏障， 随着人类社会的老龄化，脑部疾患的发病率逐年上升，已成为危害人类健康的主要疾病之一。血脑屏障（BBB）的存在严重影响了药物的脑内转运和脑部疾病的治疗。而脑内靶向递药系统的研究为其带来新的希望，其中尤以通过受体介导转运入脑的微粒递药系统的研究最为成功[1]，代表性的研究为转铁蛋白受体的单克隆抗体OX26介导入脑的空间稳定免疫脂质体。其具有诸多优点，但也存在某些不足，如载药系统脂质体的体内外稳定性均较差，往往尚未到达脑微血管的吸收部位，载药系统即已解体，严重影响了药物的脑内递释效果。鉴于此，有必要而且也亟需探寻新型的载药系统，构建更为合理、有效的脑内靶向递药系统。 聚合物泡囊（Polymersomes）是一种新型的药物载体[2]，其与普通囊泡、胶束和脂质体不同，是由具有两亲性质的、可生物降解的聚合物分子构建而成，结构类似于细胞膜的双分子层。它具有脂质体和纳米粒等微粒载药系统的主要优点，而其体内外的稳定性显著优于脂质体[3]；由于具有亲水性的内核结构，因此，对于亲水性药物，尤其是蛋白多肽类药物、基因药物的载药量可望优于纳米粒；此外，通过聚合物分子的种类、分子量、嵌段比例等选择，所构建泡囊载药系统的理化特性如粒径、载药量、表面修饰，乃至体内行为更具有主观的可调控性，因此，可望获得比现有微粒系统更佳的载药效果和脑内靶向递药特性。 本课题将聚合物泡囊与转铁蛋白受体的单克隆抗体OX26相组合构建了一种新型脑靶向递药系统——OX26-聚合物泡囊递药系统（OX26-PS）。 1仪器和材料 1.1仪器 电子分析天平(AE200，Mettler),漩涡混和器(XW-80A，上海医科大学仪器厂),旋转蒸发仪（R-200，Buchi），恒温水浴（B-490，Buchi），恒温磁力搅拌仪（B-490，Buchi），层析柱（上海锦华层析设备厂），电热恒温鼓风干燥箱（101-1-B，上海跃进医疗器械厂），紫外分光光度仪（UV-240 1PC，Shimadzu），粒度/zeta电位测定仪（NICOMPTM380 ZLS，NICOMP），冷冻干燥仪（Alpha2-4，Martin Christ），台式离心机（TGL-16C，上海安亭科学仪器厂），核磁共振仪（Mercury Plus 400MHz，Varian），X射线光电子能谱仪（PHI 5000C ESCA System，PHI），透射电镜（CM120，Philip），高效液相色谱仪（LC-10A RF-10AXL,Shimadzu），凝胶渗透色谱仪（Agilent GPC-Addon Rev.A.02.02），酶标仪（ELx800，Bio-Tek）。 1.2 材料和试剂 ε-己内酯（纯度99.9％，DOW），用氢化钙减压干燥24小时，用前减压蒸馏；单甲氧基封端的聚乙二醇（mPEG）（Mn=3000，Sigma），用前放在装有P2O5的真空器中过夜；辛酸亚锡（亚锡含量26.5％-27.5％，上海化学试剂公司），重蒸后配成10％甲苯溶液使用。马来酰胺基聚乙二醇（Maleimide-PEG）（Mn=3400，Sigma），用前放在装有P2O5的真空器中过夜。转铁蛋白受体的单克隆抗体（OX26）（Serotec）,2-iminothiolane（Sigma），10nm胶体金标记羊抗小鼠IgG（Sigma），小鼠IgG2A Elisa定量试剂盒（Bethyl）。 2实验方法 2.1 MPEG-PCL 和Maleimide-PEG-PCL的合成与表征 ε-己内酯、MPEG（或Maleimide-PEG）和适量辛酸亚锡装入干燥过的反应瓶中，加入10mL甲苯，通入干燥氮气，密封。恒温90℃ε-己内酯单体开环聚合24小时。冷水冷却终止反应，旋转蒸发去除甲苯