三、质粒及载体.ppt

质粒的主要类型 Summary of ColE1 replication control 3.质粒的稳定性 (细胞分裂中的质粒分配) 在细胞分裂过程中发生的质粒不平均的分配, 是导致 质粒不稳定性的重要原因。 要使质粒能够保持稳定的遗传,至少需要满足下面两 个方面的条件:第一是每个世代每个质粒平均都必须 至少发生一次复制；第二是当细胞分裂时,复制产生 的质粒拷贝必须平均分配到两个子细胞中去。 质粒分配到子细胞的途径可分成随机分配 (random distribution)和主动分配(active distribution) 两种不同方式。 主动分配的机理 对低拷贝质粒而言，则需要某种特定机制，将细胞分裂与质 粒复制协调起来，以保证每个细胞至少获得一个拷贝。如：F R1和P1。 这些质粒的稳定性：(1)质粒结构中还存在编码主动分配体系 的par区 。(2)质粒编码的致死蛋白来抑制不含质粒的分离子 Par区,又叫做分配区(partition regions)或分配座位(partition locus) 是指在细胞分裂过程中使质粒拷贝数均等的分配到子 细胞中的质粒DNA序列。 在F质粒中par区是同复制起点紧密相邻的，而在R1质粒中则 是远离其复制起点。质粒的复制与分配是分开独立进行的。 在F质粒中，par区由sopA和sopB两个基因及sopC区组成,这 三个因素是质粒分配的基本因素,其中sopA和 sopB 叫做反式 作用基因(trans-acting genes)编码反式作用蛋白,sopC叫做顺 式作用位点(cis-acting site)。 顺式作用位点sopC由12个43 bp的正向重复序列组成,在每个 43 bp的正向重复序列中,又有一对7 bp的反向重复序列。 SopC区的功能类似于真核染色体上的着丝粒,所以 sopC区也 叫类着丝粒位点(centrmere-like site)。 反式作用蛋白SopB与顺式作用位点sopC区结合,形成蛋白-核酸 复合体,称为分配复合体(partition complex),参与质粒的分配。 质粒DNA在位于细胞中央的复制体(replisome)的作用下进行复制。质粒复制后,分配蛋白与类着丝粒位点结合形成分配复合体。 然后,一种尚未知的结构很快地将质粒拷贝移向细胞的两极,使复制后的质粒DNA均等的分配到两个子细胞中。接着可能是在分配蛋白的作用下,使分配后的质粒限定于细胞的特定区域。 寄主致死体系 F质粒基因组中控制寄主致死功能的基因ccdA 和ccdB,属于同 一个自我调节的操纵子,分别编码分子量为8.3 kDa 和11.7 kDa 的两种蛋白。在含质粒的细胞中,CcdA蛋白作为解毒剂专门与 毒剂CcdB蛋白结合,并使之失效。 在没有CcdA蛋白的情况下,CcdB蛋白通过抑制DNA解旋酶的 活性,或是通过引发解旋酶诱导寄主染色体DNA发生双链断裂 从而使染色体在细胞分裂过程中无法进行正确的分配。 在新产生的无质粒的子细胞中,开始的时候是含有CcdA和 CcdB这两种蛋白。但由于无ccd操纵子可发生进一步的转录, 因此随后这两种蛋白质的浓度便逐渐下降稀释。 毒剂CcdB和解毒剂CcdA具有不同的稳定性,是导致分裂后细胞 致死的关键因素。也就是说,CcdA蛋白质不稳定,易被蛋白水解 酶 (protease)降解,于是较稳定的 CcdB蛋白质便可行使其对寄 主细胞的致死作用。 随机分配机制 ColE1等多数高拷贝质粒一般没有专门的par基因，它们可以 依赖于高拷贝质粒的随机分配来实现分裂过程中的稳定性。 4.质粒之间的不相容性 不相容性通常是指亲缘关系相近的两种质粒，在非选 择性条件下常常不能稳定地存在于同一个细胞中，经 过若干代的培养，只含有同一种质粒的细胞越来越多， 而含有两种质粒的细胞相对减少。 两个质粒如果不能同时稳定地共存于一种细菌细胞中， 则这两个质粒属于同一不相容群，即Inc groups；如 果能够稳定地存在于同一种细胞内，则它们属于不同 的不相容群。 RP4和RK2为IncP质粒，不能稳定地共存于大肠杆 菌细胞中，而RSF1010属于IncQ，因此能与RK2共存 大肠杆菌细胞中 质粒的不相容性与质粒复制起始密切相关 不同的不相容群的两质粒 相同的不相容群的两质粒 质粒的不相容性与质粒分配也有关系 5. 质粒的转移性 根据质粒的转移性，质粒可分为转移性和非转移性两类 转移性质粒是指质粒能自动的从一个细胞转移到 另一个细胞,甚至还能带动供体细胞的染色体DNA向 受体细胞转移,这类质粒常常被叫做自主转移质粒 (self-transmissible plasmid)。如：F质粒。 有些质粒虽然不能自主转移,但能被其它一些自主转 移质粒所转移,这类质粒又被叫做可移