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第三章 发酵液的预处理 ? 发酵液过滤特性的改变 ? 发酵液的相对纯化 微生物发酵液的特性为： ① 发酵产物浓度较低，悬浮液中大部分是水； ② 悬浮物颗粒小，相对密度与液相相差不大； ③ 固体粒子可压缩性大； ④ 液相粘度大，大多为非牛顿型流体； ⑤ 性质不稳定，随时间变化，如易受空气氧化、 微生物污染、蛋白酶水解等作用的影响 ⑥ 成分复杂，杂质较多。 这些特性使得发酵液的过滤与离心相当困难 发酵液预处理的主要目的： ⑴ 改变发酵液的物理性质，包括增大悬浮液中固体粒子的尺寸，降低液体黏度。 ⑵ 相对纯化，去除发酵液中的部分杂质（高价无机离子和杂蛋白质），以利于后续各步操作。 ⑶ 尽可能使产物转入便于后处理的一相中（多数是液相）； 一、发酵液过滤特性的改变 1.降低液体黏度 （1）稀释法 （2）加热法 液体黏度是温度的指数函数，升温是降低黏度的有效措施。根据流体力学原理，滤液通过滤饼的速率与液体的粘度成反比，降低液体粘度（加水稀释法和加热法等）可有效提高过滤速率。 注意事项：严格控制加热温度与时间。 ①加热的温度必须控制在不影响目的产物活性变质的范围内； ②温度过高或时间过长，会使细胞溶解，胞内物质外溢，增加发酵液的复杂性，影响其后的产物分离与纯化。 pH值直接影响发酵液中某些物质的电离度和电荷性质，适当调节pH值可改善其过滤特性。此法是发酵工业中发酵液预处理较常用的方法之一，方法简单有效、成本低廉。 如利用酸碱性来调节pH值使蛋白质等两性物质达到等电点得以除去。又如过滤中，发酵液中的大分子物质易与膜发生吸附，通过调整pH值改变易吸附分子的电荷性质，即可减少堵塞和污染。 3.凝聚与絮凝 采用凝聚和絮凝技术能有效改变细胞、细胞碎片及溶解大分子物质的分散状态，使其聚结成较大的颗粒，便于提高过滤速率。此外，还能有效地除去杂蛋白和固体杂质，提高过滤液质量，是工业上最常用地预处理方法之一。常用于菌体细小而且粘度大的发酵液的预处理。 （1）凝聚： 凝聚作用：向胶体悬浮液加入某种电解质，在电解质中异电离子作用下，胶粒双电层电位降低，而使胶体体系不稳定的现象，胶体粒子间因相互碰撞而产生凝集的现象。 双电层理论：菌体或蛋白质等胶体粒子表面一般都带有电荷，带电原因主要是吸附溶液中的离子或自身基团的电离。通常菌体带负电荷，由于静电作用使带正电荷的粒子被吸附在周围，在界面上形成了双电层。这种双电层的结构使胶粒之间不易聚集而保持稳定的分散状态。 凝聚值：使胶粒发生凝聚作用的最小电解质浓度(毫摩尔／升)，称为凝聚价或凝聚值。 阳离子对带负电荷的胶粒凝聚能力的次序： Al3+ Fe3+ H+ Ca2+ Mg2+ K+ Na+ Li+ 常用的凝聚剂电解质有： 硫酸铝，氯化铝、三氯化铁、硫酸亚铁、石灰等 (2)絮凝： 絮凝是指在某些高分子絮凝剂存在下，基于架桥作用，使胶粒形成粗大的絮凝团的过程，是一种以物理的集合为主的过程。 絮凝的影响因素 发酵液的性质（细胞浓度，表面电荷）； 絮凝剂的浓度，最佳用量为粒子表面积约有一半被聚合物覆盖； 絮凝剂的分子量； pH 控制； 搅拌速度。 4.添加助滤剂： 惰性助滤剂：是一种颗粒均匀、质地坚硬、不可压缩的粒状物质。 作用：助滤剂表面具有吸附胶体的能力，并且由此助滤剂颗粒形成的滤饼具有格子型结构，不可压缩，滤孔不会被全部堵塞，可以保持良好的渗透性。 常用的助滤剂： 硅藻土、膨胀珍珠岩、石棉、纤维素、未活化的碳、炉渣、重质碳酸钙 要求：助滤剂必须不吸附或很少吸附生化物质 使用方式： （1）在滤布上预先铺一层助滤剂(1-2mm)，采用此种方法，会使滤速降低，但滤液透明度很快增加。 （2）直接加入发酵液中。助滤剂用量若等于悬浮液中固体含量时，滤速最快。 5.添加反应剂： 添加可溶解的盐类，生成不溶解的沉淀，生成的沉淀能防止菌丝体粘结，使菌丝具有块状结构 沉淀本身可作为助滤剂，还能使胶状物和悬浮物凝固。 正确选择反应剂和反应条件，能使过滤速度提高3-10倍。 6.采用酶制剂分解黏性物质 如果发酵液中有不溶解的多糖存在，则最好用酶将它转化为单糖，以提高过滤速度。 例如：万古霉素用淀粉作培养基，加入淀粉酶后，能使过滤速度加快。 二 发酵液的相对纯化 发酵液杂质很多，其中影响最大的是高价无机离子和杂蛋白，预处理时，应尽量除去 杂蛋白质的危害： (1)离子交换法和大网格树脂吸附法提炼时 会降低吸附能力， (2)萃取时，易产生乳化。 (3)过滤