3种探究蛋白质互作实验技术简介_姚亭秀.pdf

中学生物教学 3种探究蛋白质互作实验技术简介 姚亭秀 （北京市第八十中学 北京 100102 ） 摘要 蛋白质与蛋白质之间相互作用构成了细胞生化反应网络的主要组成部分之一 目 。 前实验室常采用酵母双杂交技术 双分子荧光互补技术和免疫共沉淀技术研究蛋白质与蛋白 、 质的相互作用情况 从实验技术的原理 基本步骤及其优劣性对上述 种经典且常用的筛选技 。 、 3 术进行介绍。 关键词 蛋白质互作 酵母双杂交技术 双分子荧光互补技术 免疫共沉淀技术 中国图书分类号: Q81 文献标识码: B 蛋白质与蛋白质之间相互作用构成了细胞生 接近 形成一个完整的转录激活因子 从而启动报 ， ， 化反应网络的一个主要组成部分 实验室检测体内 告基因的转录 使酵母细胞在选择培养基生存 显 。 ， 、 蛋白互作的常用方法包括酵母双杂交技术（ 现 如果两者无相互作用 则报告基因无法表达 yeast ； ， ， ， ）、双分子荧光互补技术（ 酵母细胞无法在选择培养基存活 显现 如图 、 two-hybrid Y2H bimolecu- 、 （ 3 免疫共沉 图 因此 如果将 文库直接克隆到载体 lar fluorescence complementation ，BiFC ）、 4 ）。 ， cDNA 淀技术 上 用已知蛋白对其进行基因组范围内的筛选 则 （co-immunoprecipitation ，Co-IP ）、pull-down ， ， 技术 荧光能量转移技术 可筛选到能与已知蛋白互作的大量蛋白质 以备 （pull-down technology ）、 ， 等 本文对 种 研究［1 ］ （fluorescence energy transfer ，FRET ） 。 3 。 体内研究蛋白质相互作用的技术进行简述。 1 酵母双杂交技术 酵母双杂交技术是一项研究蛋白质相互作用 的技术 基于对真核生物调控转录起始的认识而 ， 研发 也是考查 种蛋白质是否互作的常用技术 ， 2 之一。 技术原理 典型真核生物的转录因子 如 1.1 （ ）含有 个不同的结构域 即 转录激活 图 1［2 ］ 图2 ［2 ］ ， GAL4 2