颜蕴文(乳腺癌患者外周血肿瘤细胞和相关基因检测研究进展).docVIP

·大会交流· 乳腺癌患者外周血肿瘤细胞及相关基因检测研究进展颜蕴文 王本忠 张敬杰 230022 安徽，安徽医科大学第一附属医院乳腺外科 在发达国家中，乳腺癌居女性恶性肿瘤发病率的首位，死亡率的第二位。许多资料显示中国大城市随着社会发展，经济生活水平提高，自然环境破坏和生活节奏加快，生活压力增大，女性乳腺癌发病率明显增加。早期发现与合理综合治疗是治愈乳腺癌的关键。因乳腺癌是异质性疾病，可据肿瘤分级、肿瘤大小、淋巴结受侵情况、受体状况及有无远处转移等对肿瘤评价并行个体化治疗。但仍有许多患者，即使是淋巴结阴性的早期患者，也可复发与转移，提示须寻找预后因素。许多文献报道，乳腺癌患者外周血中的肿瘤细胞可作一独立预后因素，并与无复发生存有关。 1 外周血肿瘤细胞 临床发现，有些术前分期早，术后病理证实未见淋巴结转移的认为是较早期的乳腺癌患者，接受正规综合治疗后，短期内很快复发转移死亡；但有些术前原发肿块较大甚至是局部晚期的患者，在经新辅助治疗后手术及相关治疗，能长期生存。这一现象用已有的经验和理论很难解释，而外周血循环肿瘤细胞微转移学说对此提供了理论依据[1]。由于外周血标本易得，创伤小，可反复采集，是较理想的检测微转移标本。近年来免疫细胞化学，流式细胞术，Western blot及PCR技术的发展使检测乳腺癌患者外周血中肿瘤细胞成为可能。研究发现，随着肿瘤细胞的不断增殖，部分细胞失去相互附着能力，从肿瘤母体脱离，降解、浸润周围组织，进入血液或淋巴系统。转移的肿瘤细胞游出血管外，通过细胞外基质迁移到合适生长部位，被激活分裂、增殖形成转移灶。某些诊疗操作也可使肿瘤细胞扩散进入外周血循环，如外科手术，空芯针活检等，在实际临床工作中怎样检测外周血液中的肿瘤细胞，及这些指标的临床意义对患者预后的预测仍需大量资料证实。 2 检测指标 2.1 肿瘤标志物CA153,CEA,CA125 近年来，肿瘤标志物检测已越来越多地用于临床诊断与治疗恶性肿瘤，国内外一些研究显示[2]，糖类抗原153(CA153)认为是诊断乳腺癌较灵敏的肿瘤标记物[3]，但单项检测CA153常有局限性，且CA153在乳腺癌早期敏感性较低，对早期诊断乳腺癌其敏感性和特异性均欠佳。CA125是卵巢癌和子宫内膜癌的特异性肿瘤标志物，在卵巢癌患者中有较高的检出率，在乳腺癌中也有较高表达[4]。CEA是一种广谱肿瘤标志物，由内胚层细胞分泌的一种糖蛋白，主要检测消化道癌，在其他肿瘤中也有一定表达。陆云飞等[5]测定CEA在乳腺癌中的诊断敏感性为19.9％，说明CEA对乳腺癌的诊治、疗效和预后观察有一定意义，相关文献[6]统计发现CA153、CA125和CEA三项联合检测阳性率为86％，可明显提高乳腺癌的诊断阳性，对肿瘤早期诊断有帮助。常用的检测方法是化学发光免疫分析法(chemiluminescent immunoassay,CLIA)。 2.2 CK19及人乳腺珠蛋白（hMAM）的检测 细胞角蛋白是上皮细胞骨架系统中间丝成分之一，表达于正常上皮及上皮源性原发肿瘤及其转移肿瘤细胞，CK19(cytokeratin19，CK19) 是其中一种组分，在各种腺上皮和腺上皮起源的恶性肿瘤中均有表达，在上皮性肿瘤组织中表达稳定[7]，但在正常外周血、骨髓组织、淋巴结中则不表达,其敏感性较高而特异性不足。因此，Watson等[8]发现了人乳腺珠蛋白(human mammaglobin，hMAM)，hMAM基因只在乳腺上皮细胞中表达且在乳腺癌中过度表达。由于其乳腺特异性的表达，hMAM mRNA和蛋白可能作为乳腺癌诊断标记。肿瘤微转移时脱落的癌细胞数量少，浓度低。以往的免疫组化、形态学等方法无法检测出血液、骨髓、淋巴结等处微转移。随着分子生物学技术的发展，实时荧光定量PCR，因敏感性高，运用实时荧光定量PCR技术联合检测CK19及hMAM的基因表达，常可作为判断游离肿瘤细胞存在，微转移及预后的一种较可行方法。乳腺癌患者外周血CK19与hMAM mRNA检出率与乳腺癌患者的淋巴结转移状况、TNM分期有明显相关性，而与患者年龄、激素受体状态及HER-2情况无明显相关，与Bernstein等[9]报道结果一致。一旦乳腺癌患者的外周血中检出CK19与hMAM mRNA的表达，则表明可能存在微转移，应予高度重视，也可进行相关检查佐证。因此，对乳腺癌患者外周血中CK19与hMAM mRNA进行长期动态监测有临床意义。 2.3细胞周期蛋白E（Cyclin E）的检测 Cyclin E是周期蛋白依赖激酶2的调节亚单位,促进细胞周期G1至S期移行过程,高水平Cylcin E加速细胞通过G1期，促进细胞分裂增殖。目前认为细胞周期的失控是造成癌细胞恶性增殖的主要原因之一，而Cyclin E作为调控细胞周期的关键蛋白，一旦