1.1、1.2DNA重组技术基本工具基因工程基本操作程序.pptVIP

1.1、1.2 DNA重组技术的基本工具 基因工程的基本操作程序 一、基因工程的概念理解 1.供体：提供_________。 2.操作环境：_____。 3.操作水平：_____水平。 4.原理：_________。 5.受体：表达目的基因。 6.本质：性状在_____体内表达。 7.优点：克服________________障碍，定向改造生物_____。 目的基因 体外 分子 基因重组 受体 远缘杂交不亲和 性状 二、DNA重组技术的基本工具 1.限制性核酸内切酶(简称：限制酶) (1)来源：主要从_____生物中分离纯化出来。 (2)作用：识别特定的___________并切开相应两个核苷酸之 间的____________。 (3)结果：产生_________或平末端。 2.DNA连接酶 (1)种类：按来源可分为E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶。 (2)作用：在两个核苷酸之间形成____________以连接_____ _________。 原核 核苷酸序列 磷酸二酯键 黏性末端 磷酸二酯键 DNA片段 两段 3.载体 (1)种类：_____、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。 (2)质粒特点 【点拨】提取目的基因和切割载体使用同一种限制酶，目的是能形成相同的黏性末端，形成重组DNA分子。 质粒 能_________ 有一个至多个________________ 有特殊的_________ 自我复制 限制酶切割位点 标记基因 三、基因工程的基本操作程序 1.目的基因的获取 (1)目的基因：编码蛋白质的_____。 (2)获取方法 从_________中获取 利用________扩增目的基因 通过___________用化学方法直接人工合成 基因 基因文库 PCR技术 DNA合成仪 2.基因表达载体的构建——基因工程的核心 (1)由图可知载体的组成：__________、启动子、终止子、 ___________。 (2)构建目的 ①使_________在_________中稳定存在，并且可以遗传给下 一代； ②使_________能够表达和发挥作用。 3.将目的基因导入受体细胞 (1)转化：目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持 ___________的过程。 目的基因 标记基因 目的基因 受体细胞 目的基因 稳定和表达 (2)常用方法 导入植物细胞：_____________、基因枪法、花粉管通 道法 导入动物细胞：_____________ 导入微生物细胞：感受态细胞法(或Ca2+处理法) 4.目的基因的检测与鉴定 (1)________________→目的基因的有无 (2)分子杂交技术→_________________ (3)_______________→目的基因是否翻译 (4)生物性状的表达与否→目的基因是否表达(个体水平) 农杆菌转化法 显微注射技术 DNA分子杂交技术 目的基因是否转录 抗原—抗体杂交 分子水平 【点拨】启动子、终止子与起始密码子、终止密码子不同：启动子、终止子在DNA 上,在遗传信息转录时起调控作用；而起始密码子、终止密码子在mRNA上,在翻译时起作用,决定翻译的开始和结束。 基因工程的工具 1.与DNA相关的酶 (1)五种DNA相关酶的比较 限制酶 DNA连接酶 DNA聚合酶 DNA (水解)酶 DNA解旋酶 形成产物 作用部位 作用底物 DNA分子 磷酸二酯键 黏性末端或平末端 DNA片段 磷酸二酯键 重组DNA分子 脱氧核苷酸 磷酸二酯键 子代DNA DNA分子 DNA分子 碱基对间的氢键 磷酸二酯键 形成脱氧核苷 酸单链 游离的脱氧核苷酸 (2)限制酶和DNA连接酶之间的关系图示 2.作为载体的条件 便于重组DNA的鉴定和选择 具有特殊的标记基因 可携带多个或多种外源基因 有一个至多个限制酶切割位点 目的基因稳定存在且数量可扩大 稳定并能复制 适应性 条件 【高考警示钟】 1.切割质粒需使用限制酶1次，切割目的基因则需要使用相同的 限制酶2次。因为质粒是环状DNA，而目的基因在DNA分子链上。 2.质粒DNA分子上限制酶切割位点的选择必须保证至少有一个标 记基因是完整的，如果标记基因全部被切开则不便于鉴定与选 择。 3.基因工程中的载体与细胞膜上物质运输的载体不同，基因工程 中的载体是DNA分子，能将目的基因导入受体细胞内，膜载体是 蛋白质，与细胞膜的通透性有关。 【典例训练1】我国科学家成功克隆了控制水稻理想株型的关键 多效基因IPA1。研究发现，基因IPA1发生突变后，会使水稻穗 粒数和千粒重(以克表示的一千粒种子的重量)增加，同时茎秆 变得粗壮，增加了抗倒伏能力。