实验-大肠杆菌感受态细胞的制备及转化.pptVIP

用CaCl2处理大肠杆菌细胞使其处于感受态后，通过热激处理可将质粒转化进入细菌中。进入细菌细胞的质粒能够自主复制并在宿主中实现其携带基因的转录、表达。 实 验 原 理 实 验 原 理 转化体的筛选方法： 主要用不同抗生素基因筛选。 常用的抗生素有：氨苄青霉素、卡那霉素、氯霉素、四环素、链霉素等。 实 验 原 理 如果将转化后的菌液涂在无选择性抗生素的培养基平板上，会出现成千上万的细菌菌落，将难以确认哪一个克隆含有转化的质粒。将经过转化后的细胞在选择性抗生素培养基中培养，才能较容易地筛选出转化体，即带有异源DNA分子的受体细胞。 实 验 原 理 本实验使用的pGEX-4T-2质粒带有氨苄青霉素抗性基因(Amp)，理论上只有转入了质粒的大肠杆菌才能在含Amp的培养基生长。但抗性筛选只是初步的筛选，可能仍有部分未转进质粒的细菌能在抗性培养基上生存（假阳性），因此还需要通过提取质粒酶切、电泳作进一步的鉴定。 实 验 原 理 实验仪器、材料、试剂 1、仪器：恒温摇床，恒温水浴锅，电热 恒温培养箱，无菌工作台，微 量移液枪。 2、材料：DH5α感受态细胞、质粒pGEX-4T2 3、试剂：LB液体及固体培养基、氨苄青霉