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除草剂骠马对草鱼遗传毒性的研究.pdf
农业环境科学学报 2006,25(2):295—300
JournalofAgro—EnvironmentScience
除草剂骠马对草鱼遗传毒性的研究
陈家长 ,杨 林 ,胡庚东 ,瞿建宏 ,吴 伟 ,范立民
(1.中国水产科学研究院淡水渔业研究中心,中国水产科学研究院内陆渔业生态环境和资源重点开放实验室,江苏 无锡 214081;
2。南京农业大学无锡渔业学院,江苏 无锡 214081)
摘 要:通过除草剂骠马对草鱼的急性毒性试验,确定其96hLC,0为0.078mg·LI。用骠马96hLC 的1/3剂量染毒草鱼,抽取染毒
前后的草鱼血液提取基因组DNA,选用20个随机引物对草鱼基因组DNA进行RAPD扩增,研究了除草剂骠马对草鱼的遗传毒
性。结果表明,在所选用的20个随机引物中,S12、S14、$20能检测出用骠马染毒前后草鱼基因组DNA的差异,除草剂骠马对草鱼
具有一定的遗传毒性。RAPD技术可运用于检测鱼类的基因突变情况。
关键词:除草剂;骠马;急性毒性;草鱼;RAPD
中图分类号:X835 文献标识码:A 文章编号:1672—2043(2006)02—0295—06
GeneticToxicityoftheHerbicidePuillaSupertoGrassCarp
CHENJia—zhang’,YANGLin,HUGeng-dong,QuJian-hong,wUWei,FANLi-min
(1.KeyOpenLaboratoryofEcologicalEnvironmentandResourcesofInlandFisheries,FreshwaterFisheriesResearchCentre,Chinese
AcademyofFisherySciences,Wuxi214081,China;2.FisheriesCollege,NanjingAgricultureUniversity,Wuxi214081,China)
Abstract:TheacutetoxicityofPumasupertograsscarpswasstudied,andLC∞valueforthefishat96hwas0.078mg·L-.Pumasuperwere
injectedintograsscarpswiththedosageof0.026mg·kg(1/3ofLC at96h).Bloodweredrawnfromcaudalveinbeforeandafterinjection
withheparinsodium anti-coagulatedsyringes.Then30txLofbloodwereaddedto470txLofsalineEDTA—Trisbuffer. Afteraddingfinal
concentrationsof20% SDSand10mg·mL~proteinaseK,themixturewasincubatedovernightat55~C.TheDNAwasextractedandpurified
bysuccessiveextractionswithphenol,phenol:chloroform:isoamylalcohol(25:24:1)andchloroform.ThentheDNAwasprecipitatedwithice—
coldabsoluteethanolandwashedwith70%ethano1.TheDNApelletwasdriedandresuspendedinTris-EDTAbuffer(pH8.0).TheDNAsin
everyexperimentalgroupweremixedanddiluted10~100timesforthePCRtemplate.20arbitraryprimers(purchasedfromShanghaiSangon
BiotechnologyCoproration,productcode:S1~$20)wereusedtoamplifythegenomicDNAofgrasscarp.Theamplificationreactionwas
perfomredin2.5 L10xPCR-Buffer,2 L25mmol·L~MgC12,1 LdNTPs。0.5txLTaqDNApolymerase, primet,5txLtemplate
DNA,andddwinflfinalvolumeof25 L_Thereactionparameterswere:predenaturingfor5minat94℃,thendenaturin
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