2008CHO细胞无血清结团灌流培养：.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（４）：５３～５８ 檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪殏 檪 殏 殏檪檪 技术与方法殏檪 檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪 ＣＨＯ细胞无血清结团灌流培养： 超声沉降柱二合一灌流系统  李　智　肖成祖　杨　琴 　黄小乐　梁倩茹　陈小飞　郑敦武　陈晓铭 （广州铭康生物工程有限公司　广州　５１０７３０） 摘要　利用ＣＨＯ细胞能在培养过程中自然结团的特性，采用超声—沉降柱二合一灌流系统能促 进细胞结团和加强截留的特性，用无血清培养基连续灌流培养基因重组ＣＨＯ细胞ＭＫ３Ａ２株，分 ? 泌表达ｒｈＴＮＫｔＰＡ获得了成功。培养周期为７７～１１０天，细胞结团率为９０％左右，直径在２８５～ ? ７ ５７０ｍ之间，细胞截留率保持在９５％左右，成活率为８５％以上，细胞密度达到２×１０／ｍｌ左右， μ ｒｈＴＮＫｔＰＡ生产率平均为８９ｍｇ／Ｌ／ｄ，最高时达２１６ｍｇ／Ｌ／ｄ。结果表明，使用该灌流系统进行细胞 ? 结团培养可以取代微载体培养用于动物细胞制药的规模化生产。 关键词　结团培养　无血清培养基　ＣＨＯ细胞　ｒｈＴＮＫｔＰＡ　超声 沉降柱二合一灌流系统 ? ? 中图分类号　Ｑ８１３．１ 　　利用搅拌式生物反应器进行批次或批次—补料的 １　材料与方法 规模化细胞培养，是当前生产基因工程药物的主要方 式。随着工程化单克隆抗体的出现和应用的日益广 １．１　细胞株 泛，原来的生产工艺已成为阻碍产量迅猛增长的瓶 　　用以生产重组人组织型纤溶酶原激活剂ＴＮＫ突变 ［１］ 体（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎｔｉｓｓｕｅｔｙｐｅｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒ 颈 ，改用连续灌流的培养方式已越来越受到重视。 ? ＴＮＫｍｕｔａｎｔ，ｒｈＴＨＫｔＰＡ）的ＣＨＯ工程细胞 ＭＫ３Ａ２由 因为它在节省设备投资和提高生产效率等方面有着明 ? ? ［２］ ［６］ 显的优势 。为了方便地实现灌流培养中的细胞截 本公司构建 ，经亚克隆获得的稳定株，经过２个月的 留，最常用的方法是采用微载体培养，并通过过滤或沉 驯化培养已能适应无血清悬浮培养，表达量为７００８ ６ 降的方法使细胞和培养基分离。但微载体本身价格昂 ＩＵ／１０／ｄ，倍增时间约为３０～４０ｈ。 贵，成本高，操作及处理复杂，为此，采用细胞的结团培 １．２　培养基 ［３，４］ 　　基础培养基为ＤＭＥＭ与Ｆ１２（１∶１）（Ｇｉｂｃｏ公司产 养已开始引起人们的兴趣 。 　　如何使细胞迅速地、良好地结团，以及如何能长期 品），通过补充部分氨基酸，如天冬氨酸、谷氨酰氨和苏 截留细胞进行灌流培养是能否将结团培养工艺真正用 氨酸等，再添加叶酸、柠檬酸铁和硫酸锌等（以上均为 于规模化生产的关键。本试验中，