复方丹参方的药效物质及作用机理研究.doc

复方丹参方的药效物质及作用机理研究 张伯礼1 王永炎2 高秀梅1 商洪才1 孙有富2 王义明3 潘桂湘1 郭利平1 胡利民1 王 怡1 张 萌1 刘密新3 赵宜军2 （1. 天津中医学院 300193；2. 中国中医研究院 100700；3. 清华大学 100084） 摘要：中医药治病的原则是“调整阴阳，以平为期”。以方剂为载体，注重整体，采用辨证论治的方法，进行综合治疗的思想符合现代治疗学的发展趋势。然而中医药缺乏对药效物质的微观分析和作用机理的科学阐释，成为影响中医药迅速发展的瓶颈。因此，以复方丹参方为范例，从方剂的配伍配比、作用机理、药效物质等方面进行系统的研究，不仅证实了复方丹参方多组分、多靶点治疗心血管病假说的科学性，而且为经典处方的二次开发提供了一种模式。本项工作将丰富现代药物治疗学，促进方剂配伍的科学诠释，开拓中药新药创制新思路，构建创新中药的理论基础。 关键词：复方丹参方 药效物质 作用机理 配伍配比 方剂是一个复杂体系，方剂作用的人体也是一个复杂系统。面对双重复杂系统，要想认识它，必须将复杂系统中非线性规律部分降解为线性规律去研究，多个线性规律的综合有助于复杂系统的认识，因此研究方剂必须遵循“复杂——简单——复杂”的原则，发挥自身的综合优势，保持中药原方的配伍特点，同时借鉴西药的“分析”方法，通过有效组分的配伍配比规律研究，最终构建药效组分基本清楚，作用靶点及原理基本清楚，高效低毒的现代中药。 作为药典方，复方丹参的生产厂家较多，且没有合理的质控标准，制剂呈现多样性。同时各种剂型使用丹参和三七不同的有效组分，导致了临床疗效差异，而且丹参、三七、冰片不同组分在心肌缺血病理环节中各自的作用亦不明确，影响了复方丹参方的作用发挥。 我们以复方丹参为基础方，进行了药效物质、配伍配比及作用机理的研究。 研究内容： 1 明确丹参、三七在全成分、有效组分层次的配伍配比规律。 配伍配比是方剂的核心与灵魂所在，是中医药的特色和优势，它既不是简单的药物作用在数量上的相加，也不是机械的毒副反应的抵消，而是在辨证立法基础上，以法统方，立方遣药，有序组合而成的有制之师。 1.1 丹参、三七全成分的配伍配比规律研究【1，2】 优选丹参/三七最佳配比是本项研究的主要内容。在进行饮片（全成分）层次配伍研究的同时，为组分配伍研究提供技术平台和方法学基础，为效应明确小复方的二次开发提供一种模式，同时为研制现代中药提供科学依据。 在整体水平上，应用犬冠状动脉左前降支结扎法造成急性心肌缺血模型，并与血流动力学模型有机结合，着眼于全成分、整体动物、多效应指标动态观察，建立了基线等比增减设计方法，对丹参/三七的不同比例： 10/0、10/1、10/3、10/6、10/10、1/10、0/10进行了多效应比较药效学研究。效应评价指标涉及到心外膜心电图（Σ-ST、N-ST ）、心肌组织缺血区范围、心肌生化标志物（cTnI、CK-MB）、冠脉血流量、心肌耗氧量、血流动力学、一氧化氮、内皮素、自由基等。 结果表明：1. 以丹参为主的药对比例组，即10/6、10/3、10/1、10/0，有明显改善犬心肌缺血的作用，减轻由心外膜心电图所标测的心肌缺血程度，减少通过TTC染色所显示的缺血区。2. 以丹参为主的药对比例组对心肌钙蛋白的增高有明显的抑制作用，反映了丹参对心血管的直接作用强于三七。这与心外膜心电图、心肌染色所反映的结果基本一致。3. 在对冠脉血流量有效增加的各组中，以丹参为主的药组（10/0、10/3、10/6）作用较强。消心痛组在给药后30min即发挥作用，但很快减弱；而中药组（10/0、10/3、10/6）作用平稳而持久、稳中有升，远后效应明显。4.10/6、10/3两组可以明显改善左室收缩及舒张功能，增加心输出量及心脏指数，减少血管总外周阻力，而左室做功没有明显增加，心率、平均动脉压的波动较小。5.0/10组（单纯三七）既促进NO的释放、保护SOD活性，又降低ET含量、减少MDA的产生，表现出较强的生物效应。 在细胞水平上，应用心脏微血管内皮细胞（CMEC）模型，对丹参、三七的上述7种比例进行了研究，其指标涉及到MTT、LDH、NO、ET等。 结果表明：1.在正常培养条件下，丹参可促进CMEC增殖，三七反之，配比随着丹参量的减少和三七量的加大增殖效果减弱；对于NO和ET均有降低趋势，但无统计学意义。 2.在缺O2损伤条件下，丹参促进CMEC增殖，三七反之，配比在10∶1~10∶6范围内，随三七量加大，促进CMEC增殖趋势明显。而在10∶10~0∶10范围内，随丹参量的减少，三七量的加大，CMEC增殖趋势减弱，各配比组均可显著降低NO释放（除10∶6 P0.05外均P0.01），且有降低ET分泌水平的趋势，而尤以10∶1