生化检验常用技术.pptVIP

第五章 常用生物化学检验技术 第一节 光谱分析技术（讲授） 第二节 电化学分析 第三节 电泳技术（讲授） 第四节 层析技术 第五节 离心技术 第六节 自动生化分析技术 　　　　 内容概要 第一节 光谱分析技术 1.分光光度技术的基本原理 2.其他光谱技术 掌握 熟悉 分光光度计的基本结构、操作方法 2.分光光度技术的定性和定量方法 内容提要 一、分光光度技术的原理 二、分光光度计的基本结构 三、分光光度计的操作方法 四、分光光度技术的定量和定性 五、其它光谱分析技术 一、分光光度技术的基本原理 T = I/I0 透光度（transmitance,T） 透射光强度和入射光强度之比。 吸光度（absorbance,A） A = -lgT 透光度的负对数。 Lambert-Beer定律 比例常数，称为吸光系数 溶液层厚度，称为光径 A＝K L C 物质对单色光的吸光度（A）与吸光物质溶液的浓度（C）和液层厚度（L）的乘积成正比。 吸光度 溶液浓度 吸光系数（K） 吸光物质在单位浓度及单位液层厚度时的吸光度。 当液层厚度为1cm，物质浓度为1mol/L时在特定波长下的吸光度。 ε是物质的特定性常数。 K＝A/LC 物理意义 摩尔吸光系数（ε） 偏离Lambert-Beer定律的因素 1.化学因素：溶液的浓度、pH、溶剂和温度等因素可影响化学平衡。 2.光学因素：非单色光、非平行光等因素，入射光的谱带越宽，其误差越大。 二、分光光度计的基本结构 可见分光光度计 紫外-可见光分光光度计 光源 单色器 比色杯 检测器 显示器 五大部份 结构 最常用 ㈠ 光源 可见光分光光度计常用光源: 钨灯或卤钨灯 紫外光光度计常用氢灯作为光源。 ㈡ 单色器 光源的复合光 单色光 种类 定义 滤光片 棱镜 光栅 常用玻璃或石英 光电管 光电倍增管 ㈢ 比色杯＝吸收池＝比色皿 材料 ㈣ 检测器 ㈤ 显示器 定义 光信号 电信号 种类 三、分光光度计的操作方法 721-A型 1.打开开关和比色池的盖子，通电20分钟使仪器预热。 2.将波长旋至测定的波长。 3.将空白液、校准液或待测液放入比色池，将空白液置于光路中。 4.打开比色池盖子，调节T为0,关上比色池盖子，调节T为100。 5.重复步骤4和5 6.将校准液或待测液推入光路，测量溶液的吸光度（A） 四、分光光度技术的定性定量方法 ㈠ 定性 2.摩尔吸光系数ε方法 1.最大吸收波长λmax方法 ㈡ 定量 1.标准曲线法 2.比较法 1.标准曲线法 将一系列浓度不同的标准液，在同一条件下分别测定吸光度，然后以标准液浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，按最小二乘法的原理，将对应各点连成一条通过原点的直线，称为标准曲线。待测溶液测定吸光度后，从标准曲线上可查出其相应的浓度。 此法对仪器的要求不高，适用于单色光不纯的仪器，适用于大批量的定量分析。 特点