生化实验(四).ppt

实验器材 公用试剂 小组试剂 离心机 实验三 存在问题 1、检测管、唾液淀粉酶滴管、1%淀粉液滴管混用，使 试剂污染。如：淀粉被水解。 2、实验结束后，个别小组试管未从水浴锅取出，记号笔未盖盖子。 3、第二页，实验内容序号和实验项目名称补充完整。 4、老师改过的内容，没有及时订正。 5、实验三整体书写很规范，个别同学没有使用“三线 表” ，实验结果没有做出正确分析。 6、学习小结部分，要给予正确评价。 实验课存在问题及要求 1.上课迟到15分钟以后则视为缺勤。 2.实验小组成员及座位不能随意调换，课堂上不能大声喧哗。 3.实验过程中，普遍存在小组内试剂、器材交叉使用问题，以后要杜绝。 4.实验结束后，试剂及器材均应归位，该指标作为“职业习惯是否得当”的考核标准。 5.实验课请假时，必须携带假条，且请假当次的实验报告册不能再补。 6. 值日生按照指导教师要求认真打扫卫生。 * 实验四 酵母RNA的分离及组分鉴定 （综合性，3学时，P） 一、实验目的 二、器材与试剂 三、实验原理 四、操作过程 五、注意事项 主要内容 了解生物体内RNA的存在形式。 掌握浓盐法提取酵母RNA的原理及方法。 掌握RNA组成成分及鉴定的原理及方法。 一、实验目的 1、器材： 95 ℃恒温水浴箱、离心机、离心管、移液管、吸耳球、 玻棒、试管、RNA水解液滴管等。 2、试剂： 公用试剂（ 7种）：（不要拿到自己座位）干酵母粉、 6mol/L HCl、钼酸铵、0.1mol/LAgNO3、4%维生素C、 1mol/L氨水、苔黑酚。 小组试剂（2种）： 10％ NaCl溶液、10％H2SO4。 二、器材与试剂 三、实验原理 酵母富含核酸，其中以RNA含量较多（占干重的3%-10%）而DNA较少（约占，干重0.5%以下）。 1、核酸的分类与分布 2、材料选择 DNA：主要存在于细胞核的染色体中, 线粒体、叶绿体、质粒有少量 RNA：存在于细胞质中 10％NaCl使RNA核蛋白中的RNA解聚，并溶于盐溶液中，离心除去菌体残渣及变性蛋白质后，调节溶液的pH至RNA的等电点（pH2.0~2.5），RNA即可沉淀析出。 3、浓盐法提取RNA RNA可被酸水解成磷酸、嘌呤碱和核糖。 磷酸：能与钼酸作用生成磷钼酸，后者可还原成蓝色的钼蓝。（还原剂：维生素C） 嘌呤碱：可与硝酸银产生白色的嘌呤银化合物沉淀。 核糖：与强酸共热生成糠醛，后者与苔黑酚缩合成墨绿色化合物。 4、RNA组分鉴定 四、操作过程 1．酵母RNA的提取 2．RNA的水解 3．RNA的组分鉴定 1．酵母RNA的提取（浓盐法） 干酵母一包约（ 0.5g） 置试管内 10％NaCl 5ml 用玻棒搅匀后 加热10min 加入 10min内 至少搅拌两次 至离心管3000rpm， 离心10分钟 小心将上清液一次性倒入另一试管 6mol/L HCl 2滴 搅匀 至离心管，静置5min 3000rpm， 离心10分钟 弃去上清液 收集沉淀 沸水浴 调pH至RNA 等电点 使RNA解聚， 并溶于10%NaCl 除去残渣及变性蛋白 沉淀为RNA 2．RNA的水解 沉淀 10％硫酸3mL RNA水解液滴管搅匀 沸水浴中5min 水解液 水解液是否为磷酸、嘌呤碱和核糖？ 3．RNA的组分鉴定 （1）磷酸的鉴定 10滴水解液 4滴钼酸铵试剂 4%维生素C 6滴 摇匀 沸水中加热 3-5min 观察有何颜色变化？ （2）嘌呤碱的鉴定 0.1mol/L 硝酸银5滴 逐滴加 先有沉淀，滴加到消失后 l mol/L氨水 水解液10滴 观察有无白色沉淀？ （3）核糖的鉴定 10滴水解液 苔黑酚1mL 沸水中加热 5-10min 观察有何颜色变化？ 混匀 离心机 RNA提取时，加入10%NaCl搅匀后置沸水浴10min，加热过程中应至少搅动两次。 离心时，必须先使用天平对所离心样本（包括离心套筒）称量配平。离心结束后，待仪器完全停止转动后方可打开盖子取出离心管，套管放回原位。 第一次离心结束后，应将上清液一次性倒入另一试管，避免沉淀漂浮，混入上清液。 嘌呤碱鉴定时， l mol/L氨水要逐滴加入。 五、注意事项 实验三 存在问题 激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响 结果展示