生物仪器分析及实验技术期末考试.docx

一、填空题1．发酵液常用的固液分离方法有离心和过滤等。2.萃取过程设计分为单级萃取、多级错流萃取、多级逆流萃取、回流萃取、连续逆流萃取四种3．蛋白质沉淀方法分盐析法、有机溶剂沉淀法、等电点沉淀法、重金属盐沉淀法、生物碱试剂以及某些酸类沉淀法、非离子多聚物沉淀法、加热凝固法七类4.电泳用凝胶制备时，过硫酸铵的作用是引发作用；甲叉双丙烯酰胺的作用是交联作用；TEMED的作用是增速剂。5.影响盐析的因素有PH值、温度、溶质的类型和溶质的浓度。二、基本概念1.非水相生物催化技术非水相生物催化技术兴起于20世纪80年代初期，突破了酶只能在单一水溶液介质中反应的局限。该项技术主要以酶和细胞作为生物催化剂，在非水介质中进行催化反应，通过构象的改变，表现出较好的催化性能，如：活力、选择性、稳定性等。2.细胞融合技术细胞融合（cell fusion）也称细胞杂交、原生质体融合或体细胞杂交，是指细胞通过介导和培养，在离体条件下用人工方法将不同种的细胞通过无性方式融合成一个核或多核的杂合细胞的过程。细胞融合技术的发展，打破了生物种间障碍，能定向地制造出新的有用的微生物；增加微生物体内控制代谢产物产量的基因拷贝数，可以大幅度地提高目标产物的产量；将动、植物或某些微生物特有产物的控制基因植入细胞中，快速经济地大量生产这些产物；将具有不同性能的多种质粒植入，使新菌株在清除污染或以非粮食物质为原料进行发酵生产或环境保护。3.定点突变定点突变(site-directed mutagenesis)技术可以通过盒式取代诱变、寡核苷酸引物介导和PCR介导等方法，在已知DNA序列中取代、插入或缺失一定长度的核苷酸片段，一般使DNA所表达的目的蛋白性状向有利的方向变化。该方法比使用化学因素、自然因素导致突变的方法具有突变率高、简单易行、重复性好等特点。4.DNA Shuffling技术DNA Shuffling技术，也称基因改组技术，是基因在分子水平上进行有性重组。对一组基因群体（进化上相关的DNA序列或曾筛选出性能改进序列）进行重组创造新基因；在DNA片段组装过程中也可能引入点突变，对从单一序列指导进化蛋白质有效；产生的多样性文库，可以有效积累有益突变，排除有害突变和中性突变，同时也可实现目的蛋白多种特性的共进化。5.底物工程底物工程主要研究的问题有：一个目标产品可以从不同的起始原料(底物)出发，这就涉及到合成路线的设计和选择问题：不仅要考虑原料的来源、价格、反应的难易程度和收率高低，而且要考虑到生物催化步骤与其前/后化学转化步骤的衔接和耦合，以达到整体最优，有利于工业化应用。对于双底物或多底物的酶反应而言，在主要底物确定的情况下，辅助底物的选择和优化也很重要，这不仅因为它的分子结构和反应活性将关系到反应的平衡位置和速率快慢，而且因为一些辅底物(Co-substrates)或其相应的第二产物可能会对酶产生抑制甚至使酶失活。有时还可以通过基团保护/脱保护的方法来提高生物催化的选择性。三、简答题1.常规PCR和荧光定量PCR的异同及应用异同：常规PCR是利用DNA半保留复制的原则，体外酶促合成特异DNA片断，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。主要由高温变性、低温退火和适温延伸三个步骤反复的热循环构成，通过检测插入dna中核酸染料的量来测定pcr最终产物量。实时荧光定量PCR(Real time fluorescence quantitative PCR，RT-qPCR)是一种实时监控DNA扩增反应的技术。在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累进行实时监测整个PCR过程，并将DNA的累积速率绘制成动态变化图，在扩增的指数期对起始模板进行定量，从而消除了在测定终端产物丰度时有较大变异系数的问题。常规PCR的应用：1．科研领域：基因克隆；不对称PCR制备单链DNA用于DNA测序；突变分析2.医学应用：检测细菌、病毒类疾病；诊断遗传疾病；诊断肿瘤；应用于法医物证学，犯罪现场标本分析。3.用于人类基因组工程，遗传图谱的构建，DNA测序，表达图谱4.其他应用：反向PCR测定未知DNA区域；反转录PCR（RT-PCR）用于检测细胞中基因表达水平、RNA病毒量以及直接克隆特定基因的cDNA；荧光定量PCR用于对PCR产物实时监控；cDNA末端快速扩增技术实时荧光定量PCR的应用医学领域RT－qPCR 技术目前应用最为广泛的是医学领域，主要如下：在临床定量中的应用有：病原微生物含量与病情的轻重程度、传染性及治疗效果之间的关系新的治疗与预后指标的研究病原微生物含量与用药之间的关系新的病原体分子诊断标准超早期感染治疗用药物及疗法的研究与开发在传染病流行病学方面的应用：医院血站防疫站传染病的发病监控、预测与预防mRNA的表达水平与是否肿瘤及其进展的关系肿瘤相关基因表、肿瘤